[生物——选修模块3：现代生物科技专题]

图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，且限制酶的切点是唯一的，外源DNA插入会导致相应的基因失活，请回答下列问题。

（1）基因工程中最常用的载体是________，而作为基因表达载体，除图1所示结构外，还需具有________。

（2）根据图中所给信息，构建基因表达载体时，应选用的限制酶是________。

（3）如图2，如果要利用PCR扩增出目的基因，应选择引物________。PCR过程中，除了要加入足量的引物外，还需要加入________酶，DNA链的延伸一般需要的温度为________。

（4）如果要目的基因导入大肠杆菌，一般要用Ca^2＋溶液处理细菌，使其达到________，有利于吸收外源DNA。为了筛选含目的基因的大肠杆菌，应在培养基中添加________。

【考点】PCR技术，基因工程的原理，基因工程的操作程序

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