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  • 嗜热菌可以生活在98℃的高温环境中,研究发现其耐热性与基因H的表达产物有关。下图表示某研究小组利用大肠杆菌对H基因实行的克隆和表达过程,其中NdeⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、SalⅠ四种限制酶的识别序列和酶切位点分别为CATATG、GAATTC、AAGCTT、GTCGAC。请分析回答:

    (1)图中的结构A是________,其主要作用是________。一个完整的基因表达载体组成,除了质粒1中所示结构以外,还应该含有________。

    (2)用图中质粒1和H基因构建重组质粒,应选用________两种限制酶进行切割,影响限制酶处理效果的因素可能有________(多选)。

    ①反应温度 ②缓冲液pH ③限制酶的浓度 ④DNA样品的纯度

    (3)实验中发现,重组质粒导入大肠杆菌后H基因的表达效率很低,但在含有质粒2(辅助性质粒)的细胞中,H基因可以高效表达。为了筛选出转入了两种质粒的受体菌,应在筛选平板培养基中添加________,整个实验过程应保持________操作。

    (4)PCR反应中引物的设计非常关键,据图分析,扩增H基因时应选择的一对引物是________。

    A.引物Ⅰ:···GGGAATTC···;引物Ⅱ:···CTCATATG···

    B.引物Ⅰ:···GAATTCCC···;引物Ⅱ:···CATATGAG···

    C.引物Ⅰ:···GGAAGCTT···;引物Ⅱ:···AAGCTTCC···

    D.引物Ⅰ:···CTCATATG···;引物Ⅱ:···AAGCTTAAGCTT···

    【考点】PCR技术,基因工程的操作程序
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    难度:较难
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