科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长．质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，如图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞．请据图作答：

（1）利用PCR技术扩增鱼的抗冻蛋白基因，向反应的试管中添加模板DNA、四种脱氧核苷三磷酸（dNTP）、 ______ 和 ______ ．
（2）基因工程的核心是 ______ ，进行这项操作时，为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶 ______ 同时对含鱼抗冻蛋白基因的DNA和质粒进行切割，切割后用 ______  酶处理．
（3）研究人员通常采用 ______ 法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内．在培养基中的添加 ______ ，来筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，筛选后，为了进一步确定是否含目的基因，用 ______ 方法检测是否有目的基因．通常采用 ______ 技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质，在这项技术中的鱼的抗冻蛋白是 ______ ．

【考点】基因工程的操作程序

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