下面是将某细菌的基因A导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的示意图．

请据图回答：
（1）获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在 ______ 酶的催化下，合成互补的单链DNA，然后在 ______ 作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的 ______ 序列，推测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的 ______ 序列，再通过化学方法合成所需基因．
（2）利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有 ______ 、 ______ 、4种脱氧核苷酸三磷酸和耐热性的DNA聚合酶，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成．
（3）由A和载体B拼接形成的C通常称为 ______ ．
（4）在基因工程中，常用Ca²⁺处理D，其目的是 ______ ．