如图所示为A、B、C三种质粒和一个含目的基因D的DNA片段示意图。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因,Tc为四环素抗性基因,lacZ为蓝色显色基因。图中EcoR Ⅰ、Pvu Ⅰ为两种限制酶,质粒上限制酶括号内的数字表示限制酶切割位点与复制原点的距离。请回答下列问题:

(1) 图中三种质粒中不能作为目的基因载体的是_______,理由是____________、____________。 

(2) 在基因工程的操作过程中,需要检查目的基因是否重组到质粒中,应使用____酶切重组质粒,完全酶切后,进行电泳检测。若电泳图谱中出现长度为1.1 kb和5.6 kb,或者____kb和____kb的片段,则可判断该重组质粒已与目的基因重组成功。 

(3) 为研究目的基因D的功能,研究人员用下图所示的引物组合分别扩增D基因的D₁片段、D₃片段(DNA复制子链的延伸方向5'→3')。

注:引物Ⅱ、Ⅲ上的x、y片段分别与N基因两端互补配对。

①用引物Ⅰ、Ⅱ组合扩增后,得到的绝大部分DNA片段是下图中的__________。 

②将大量N基因片段与扩增得到的D₁片段、D₃片段置于PCR反应体系中进行扩增,得到的绝大多数扩增产物是____(选填“D₁—N”“D₁—D₃—N”“D₃—N”或“D₁—N—D₃”)。 

【考点】基因工程的操作程序

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