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  • 下面是将乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg导入巴斯徳毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资枓:

    资料1:巴斯德毕赤酵母菌可用培养基中甲醇作为其生活的唯一碳源,此时AOX1基因受到诱导而表达(5′AOX1和3′AOXl(TT)分别是基因AOX1的启动子和终止子)。

    资料2:巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒,所以改造出了图1所示的pPIC9K质粒用作载体,其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组,将目的基因整合于染色体中已实现表达。

    资料3:限制酶酶切位点


    (1)如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组,应在图2中HBsAg基因两侧的A和B位置接上_______限制酶识别序列,这样可避免质粒和目的基因自身环化。

    (2)为确认巴斯德毕赤酵母茵转化是否成功,在培养基中应该加入卡拉霉素以便筛选,转化后的细胞中是否含有HBsAg基因,可以用___________方法进行检测。

    (3)转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后,需要向其中加入___________以维持其生活,同时诱导HBsAg基因表达。   

    (4)与大肠杆菌等细菌相比,用巴斯德毕赤酵母菌细胞作为基因工程的受体细胞,其优点是在蛋白质合成后,细胞可以对其进行___________并分泌到细胞外,便于提取。

    (5)下图为HBsAg某DNA片段一条链的碱基排列顺序。其中图1的碱基排列顺序已经解读,其顺序是:GGTTATGCGT,请解读图2显示的碱基排列顺序:______________________。

    【考点】基因工程的原理,基因工程的应用,基因工程的操作程序
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    难度:较难
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