为了获得较多、较纯、较完整的甜菜总DNA,科研人员比较了A方法(通过CTAB裂解细胞,并与蛋白质形成复合物)、B方法(通过SDS裂解细胞释放核DNA,使蛋白质变性)、C方法(通过高盐沉淀蛋白质)从嫩叶、块根中提取总DNA的效果,主要实验步骤和相关检测结果如下,其中氯仿—异戊醇不溶于水且密度均大于水,DNA不溶于氯仿—异戊醇,蛋白质等溶于氯仿—异戊醇。分析回答:
主要提取过程
①将液氮冷冻的组织研磨成粉末
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②分别用A、B、C三种不同方法处理
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③DNA粗提液在65 ℃水浴保温60 min,搅拌均匀
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④加氯仿—异戊醇,离心取 ? ,加冷酒精,收集沉淀
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⑤加入RNA酶,37 ℃水浴保温20 min,重复步骤④
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⑥将沉淀室温干燥后,溶于超纯水中,-20 ℃保存备用
结果检测
组织 | 方法 | 组别 | OD260/OD230 | OD260/OD280 | 得率/(μg·mg-1) |
嫩叶 | A方法 | A1 | 1.970 | 1.821 | 0.105 |
B方法 | B1 | 1.973 | 1.719 | 0.096 |
C方法 | C1 | 1.647 | 1.568 | 0.082 |
块根 | A方法 | A2 | 1.888 | 1.888 | 0.029 |
B方法 | B2 | 1.811 | 1.682 | 0.030 |
C方法 | C2 | 1.376 | 1.320 | 0.020 |
注: ①纯净的DNA样品OD260/OD230值约为2.0,过低表明小分子物质残留较多;②纯净的DNA样品OD260/OD280值约为1.8,若比值大于1.8表示存在RNA残留,若小于1.8表示存在蛋白质残留。③得率是指每毫克组织所提取的DNA量。
(1) 步骤③将DNA粗提液在65 ℃水浴保温60 min的目的是 。步骤④“?”表示 。步骤⑤中加RNA酶的作用是 。
(2) 影响DNA纯度的物质主要有 。提取的DNA中RNA残留较多的方法是 。以嫩叶为材料提取DNA的得率较高,原因是 。
(3) 电泳可以直观对比DNA的完整性,分子大小不同的DNA在凝胶上迁移速率不同,从而产生不同的条带。下图是上述实验中提取到的总DNA凝胶电泳结果,其中M是已知大小的不同DNA的混合物。实验结果显示A、B方法提取的总DNA电泳结果只有一条带,而C方法有明显的“拖尾”现象。
①只出现一条带的原因是 。
②出现“拖尾”现象的原因是 。