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  • 为生产具有特定性能的α-淀粉酶,研究人员从某种海洋细菌中克隆了α-淀粉酶基因(1656个碱基对),利用基因工程大量制备α-淀粉酶,实验流程见下图。请回答下列问题:

    (1)利用PCR技术扩增α-淀粉酶基因前,需先获得细菌的______。
    (2)为了便于扩增的DNA片段与表达载体连接,需在引物的______端加上限制性酶切位点,且常在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点,主要目的是______。
    (3)进行扩增时,反应的温度和时间需根据具体情况进行设定,下列选项中______的设定引物有关,______的设定与扩增片段的长度有关。(填序号)
    ①变性温度②退火温度   ③延伸温度④变性时间⑤退火时间   ⑥延伸时间
     (4)下图表示筛选获得的工程菌中编码α-淀粉酶的mRNA的部分碱基序列:

    图中虚线框内mRNA片段包含______个密码子,如虚线框后的序列未知,预测虚线框后的第一个密码子最多有______种。
    (5)获得工程菌表达的α-淀粉酶后,为探究影响酶活性的因素,以浓度为1%的可溶性淀粉为底物测定酶活性,结果如下:

    缓冲液

    50mmol/L Na2HPO4-KH2PO4

    50mmol/L Tris-HCl

    50mmol/L Gly-NaOH

    pH

    6.0

    6.5

    7.0

    7.5

    7.5

    8.0

    8.5

    9.0

    9.0

    9.5

    10.0

    10.5

    酶相对活性%

    25.4

    40.2

    49.8

    63.2

    70.1

    95.5

    99.5

    85.3

    68.1

    63.7

    41.5

    20.8

    根据上述实验结果,初步判断该α-淀粉酶活性最高的条件为_________________。

    【考点】遗传信息的转录和翻译,PCR技术,基因工程的操作程序,探究影响酶活性的因素实验
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    难度:较难
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