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  • 某研究性学习小组利用“荧光素——荧光素酶”生物发光法,测定人参愈伤组织中ATP的含量,以研究人参细胞能量代谢的特点。

    实验原理:荧光素在荧光素酶、ATP等物质参与下,进行反应发出荧光;用分光光度计可测定发光强度;当荧光素和荧光素酶都足量时,在一定范围内,ATP的含量与发光强度成正比。

    实验步骤:

    步骤一:ATP的提取:称取一定量的人参愈伤组织,研磨后沸水浴10 min,冷却至室温,离心,取上清液。

    步骤二:ATP的测定:吸取一定量的上清液,放入分光光度计反应室内,并注入适量的所需物质,在有氧等适宜条件下进行反应,记录发光强度并计算ATP含量。

    请回答下列问题:

    (1)步骤一中的沸水浴处理,使酶的____________________被破坏而失活。

    (2)步骤二注入的物质中,属于反应物的是____________________;分光光度计反应室内能量形式的转换是____________________

    (3)荧光素酶价格昂贵,为能准确测定出ATP的含量,又能节省酶的用量,学习小组探究了“测定ATP时所需荧光素酶溶液的最佳浓度”,实验结果如图。


    ①学习小组配制了1×10-8mol/L ATP标准液、70 mg/L荧光素溶液(过量)和浓度分别为0 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、30 mg/L、40 mg/L、50 mg/L、60 mg/L的荧光素酶溶液进行实验。

    ②结果表明:图中____________________点所对应的荧光素酶浓度为最佳浓度。e、f、g点所对应的荧光素酶浓度不同,但发光强度相同,这是因为____________________

    (4)ATP测定对食品卫生监控有重要意义。食品卫生检验人员利用上述生物发光法测定某熟食品样品中细菌的ATP总含量,测算出了细菌的数量,从而判断食品污染程度。作出上述判断的理由是:每个细菌细胞中ATP的含量____________________

    【考点】ATP的分子结构和功能,ATP和ADP的转化
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    难度:较易
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