基因打靶是通过外源DNA与染色体DNA同源序列之间的重组来改造基因组特定位点,从而改变生物遗传特性的方法。下图是利用该技术将小鼠的胰岛素基因(靶基因)置换成人胰岛素基因的过程示意图,其中neo
r是新霉素抗性基因;HSV-tk基因的表达可以使无毒的丙氧鸟苷代谢为毒性物质,导致细胞死亡。请回答下列问题:
(1)打靶载体中含有的目的基因是 ,需将该目的基因和与细胞内靶基因同源的DNA片段都重组到质粒上,整合时用到的酶有 。
(2)图中的同源重组位点是指打靶载体和小鼠基因组DNA中具有 的DNA片段。
(3)将打靶载体线性化是选择的限制性核酸内切酶的识别序列不能位于 等中。线性化的打靶载体可采用 法导入小鼠细胞。将小鼠细胞培养在含 的培养液中,可以成功筛选出打靶成功的小鼠细胞,经细胞培养后可以获得大量的具有目的基因的细胞。
(4)可以通过动物细胞克隆技术获得含人胰岛素基因的小鼠,其过程是将打靶成功的小鼠细胞的细胞核移植到 中,培养到 期移植到代孕母鼠子宫内进行发育。