Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞．科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如图：

（1）步骤①中所选的卵母细胞应处于 ______ 期．
（2）步骤②中，重组胚胎培养到囊胚期时，可从其 ______ 分离出ES细胞，ES细胞在形态上表现为 ______ 的特点．
（3）步骤③中，需要构建含有Rag₂基因的 ______ ．可以根据Rag₂基因的核苷酸序列设计合成 ______ ，利用 ______ 技术扩增Rag₂基因片段．用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在目的基因所在DNA片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段．为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有 ______ 酶的酶切位点．
（4）为检测Rag₂基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质，用抗Rag₂蛋白的抗体进行 ______ ．