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  • 草甘膦是一种广谱除草剂,其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成,影响植物正常生长,最终导致植物死亡。目前,发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因,若将该基因转入植物细胞内,获得的转基因植物能耐受高浓度的草甘膦。取6株植物,其中,植物A和D对草甘膦敏感,B和E对草甘膦天然具有抗性,C和F则经过转基因处理,但是否成功未知。图l为4种限制酶的识别序列和酶切位点,图2为含有目的基因的DNA片段及其具有的限制酶切点。据图回答︰


    (1)若A、B、C浇清水,D、E、F浇含有草甘膦的水,则A~F植物中,一定能正常生长的是________。

    (2)一个完整的基因表达载体除复制原点、启动子和终止子外,还应包括________。若利用酶切法获得目的基因,最应选择的限制酶是________和________。

    (3)通常用_________法将EPSPS基因导入植物体内。假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中,但植物F没有表现出抗性,分析可能的原因________。

    (4)图甲是某目的基因(4.0kb,1kb=1000对碱基)与大肠杆菌pUC18质粒(2.7kb)重组的示意图。图中Ap是抗氨苄青霉素基因,lacZ是显色基因,其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧,其控制合成的物质能使菌落呈现蓝色(图乙中深色圆点即为蓝色菌落)。


    ①图乙培养基中含有氨苄青霉素,则培养基中出现的________(白色/蓝色)菌落中会含有重组质粒。

    ②现用EcoRI酶切重组成功的质粒(重组质粒上目的基因的插入位点与ECORI的识别位点之间的碱基对忽略不计),酶切后进行电泳观察,会出现K度为________kb的片段。

    【考点】基因工程的原理,基因工程的操作程序,基因工程的应用
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    难度:较难
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