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  • EPSPS是叶绿体中的一种酶,它能催化芳香族氨基酸的合成;草甘膦是一种除草剂,它能抑制EPSPS的作用而使植物死亡.因此草甘膦的使用也会影响到农作物的正常生长.目前,已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因,若将该基因转入农作物植物细胞内,从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦.
    (1)普通大豆施用草甘膦之后,电镜下可以看到叶绿体很快变形,其原因是氨基酸合成受阻直接影响了    的合成,使叶绿体内的其结构和功能严重受损从而使植物死亡.
    (2)研究人员以大豆“黑农37”胚尖为外植体,利用农杆菌介导法将EPSPS基因成功转入大豆,大豆产生了更多的EPSPS来抵抗草甘膦,成为抗除草剂(草甘膦)大豆.
    ①下表分别表示4种限制性核酸内切酶的酶切位点.假设位于EPSPS基因两侧的DNA序列分别为,则应选择表中酶      进行酶切.若EPSPS基因的右侧序列如后者表所示,请在下面方框内画出经酶切后产生的两个末端的碱基序列.

    酶的种类1244
    酶切位点
    ②若多个如图1所示的片段甲和片段乙混合在一起,用DNA连接酶拼接得到环状DNA,其中只由两个DNA片段连接成的环状DNA分子有    种.

    (3)要测定EPSPS基因最终是否整合到大豆的某一染色体上,可用    方法,要测定EPSPS基因是否转录,可采用    方法.
    (4)图2是目的基因EPSPS(4.0kb,1kb=1000对碱基)与pUC18质粒(2.7kb)重组的示意图.图中Ap′是抗氨苄青霉素基因,lacZ是显色基因,其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧.现用EcoRI酶切质粒,酶切后进行电泳观察,若出现长度为    kb和    kb的片段,则可以判断该质粒已与目的基因重组成功.(重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRI的识别位点之间的碱基对忽略不计).
    【考点】基因工程的原理及技术
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    难度:中等
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