多聚半乳糖醛酸酶PG能降解果胶使细胞壁破损，成熟的番茄果实中，PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜．利用基因工程减少PG基因的表达，可延长果实保质期．科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入番茄细胞中，得到转基因番茄，具体操作流程如图．据图回答下列问题：

（1）若已获取PG的mRNA，可通过    获取PG基因．
（2）构建基因表达载体时，用限制酶切割DNA后可能产生黏性末端，也可能产生    ，后者需用    （E．coli DNA连接酶、T₄DNA连接酶）将双链DNA片段“缝合”起来．“缝合”的过程，就是恢复被限制酶切开的两个脱氧核苷酸之间的    的过程．
（3）用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有    的培养基进行筛选．
（4）将转入反向链接PG基因的番茄细胞培育成完整的植株，需要用    技术；其中，愈伤组织经    形成完整植株．
（5）用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，培养24～48h后取样，在质量分数为25%的蔗糖溶液中，通过观察细胞是否发生    现象来鉴别细胞壁是否再生．

【考点】基因工程的原理及技术

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