Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞．科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如图：

（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的    （结构）．
（2）步骤③中，需要构建含有Rag₂基因的表达载体．可以根据Rag₂基因的    设计引物，利用PCR技术扩增Rag₂基因片段．用Hind III和Pst I限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段．为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有    酶的酶切位点．
（3）为检测Rag₂基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的    ，用抗Rag₂蛋白的抗体进行杂交实验．

【考点】基因工程的原理及技术,胚胎干细胞的来源及分化

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