回答下列有关生物工程的问题.
Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞.科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗,其技术流程如图1(图中数字序号表示的是相关过程).
图1
图2
(1)在核移植前应去除
的细胞核.
(2)过程②,重组胚胎培养到一定时期时,可从其
中分离出的ES细胞的特点是
.
(3)过程③中,需要构建含有Rag2基因的表达载体,具体过程如图2.图中Amp
r表示青霉素抗性基因,Tet
r表示四环素抗性基因,限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同.可以根据Rag2基因的
设计引物,利用PCR技术扩增Rag2基因片段.为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选,④过程采用的酶是
,⑤过程采用的酶是
.如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ同时对质粒进行切割,假设同时只有任意两个位点被切断且每次机会相等,则形成的DNA片段有
种,其中含有完整四环素抗性基因的DNA片段占
.
(4)在ES细胞培养液中加入
可以体外诱导定向形成造血干细胞.
(5)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的
,用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验.