9.
请分析回答下列有关基因工程问题
胰岛素A、B链分别表达法是生产胰岛素的方法之一. 图1是该方法所用的基因表达载体,图2表示利用大肠杆菌作为工 程菌生产人胰岛素的基本流程(融合蛋白 A、B分别表示β-半乳糖苷酶与胰岛素A、B链融合的蛋白).
(1)图1基因表达载体中没有标注出来的基本结构是
______
.
(2)图1中启动子是
______
酶识别和结合的部位,有了它才能启动目的基因的表达;氨苄青霉素抗性基因的作用是
______
.
(3)构建基因表达载体时必需的工具酶有
______
.
(4)β-半乳糖苷酶与胰岛素A链或B链融合表达,可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部,其意义在于
______
.
(5)溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键,用溴化氰处理相应的融合蛋白能获得完整的A链或B链,且β-半乳糖苷酶被切成多个肽段,这是因为
______
.
(6)根据图2中胰岛素的结构,请推测每个胰岛素分子中所含游离氨基的数量.你的推测结果是
______
,理由是
______
.
(7)如果图1所示的载体可被A、B、C三种限制性内切酶同时切割.单独A切割得一条长链,单独B切也得一条长链,A和C同时切割得2个500bp和1个2666bp片段,B和C同时切割得2个250bp和1个3166bp片段.若以A的切割位点为计算起点,则B的切割位点与A点最短长度为
______
,C的两个切割位点与A点的最短距离分别为
______
、
______
.
(8)如限制酶SmaI能识别如图3的「5‘-CCCGGG-3’」6个碱基序列,并在中央(图中箭头位置)切断DNA.则用限制酶SmaI处理如图的线状双链DNA时,请以箭头标出切割位置.