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            • 1． EPSPS是叶绿体中的一种酶，它能催化芳香族氨基酸的合成；草甘膦是一种除草剂，它能抑制EPSPS的作用而使植物死亡．因此草甘膦的使用也会影响到农作物的正常生长．目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入农作物植物细胞内，从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦．
              （1）普通大豆施用草甘膦之后，电镜下可以看到叶绿体很快变形，其原因是氨基酸合成受阻直接影响了    的合成，使叶绿体内的其结构和功能严重受损从而使植物死亡．
              （2）研究人员以大豆“黑农37”胚尖为外植体，利用农杆菌介导法将EPSPS基因成功转入大豆，大豆产生了更多的EPSPS来抵抗草甘膦，成为抗除草剂（草甘膦）大豆．
              ①下表分别表示4种限制性核酸内切酶的酶切位点．假设位于EPSPS基因两侧的DNA序列分别为和，则应选择表中酶      进行酶切．若EPSPS基因的右侧序列如后者表所示，请在下面方框内画出经酶切后产生的两个末端的碱基序列．

              酶的种类1244
              酶切位点
              ②若多个如图1所示的片段甲和片段乙混合在一起，用DNA连接酶拼接得到环状DNA，其中只由两个DNA片段连接成的环状DNA分子有    种．

              （3）要测定EPSPS基因最终是否整合到大豆的某一染色体上，可用    方法，要测定EPSPS基因是否转录，可采用    方法．
              （4）图2是目的基因EPSPS（4.0kb，1kb=1000对碱基）与pUC18质粒（2.7kb）重组的示意图．图中Ap′是抗氨苄青霉素基因，lacZ是显色基因，其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧．现用EcoRI酶切质粒，酶切后进行电泳观察，若出现长度为    kb和    kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功．（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRI的识别位点之间的碱基对忽略不计）．
              难度：中等
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            • 2． 在图所示的质粒PZHZ11（总长为3.6kb，1kb=1000对碱基因）中，lacZ基因编码β-半乳糖苷酶，后者催化生成的化合物能将变色的大肠杆菌染成蓝色．

              （1）若先用限制酶BamHⅠ切开pZHZ11，然后灭活BamHI酶，再加DNA连接酶进行连接，最后将连接物导入足够数量的大肠杆菌细胞中，则含3.1kb质粒的细胞颜色为    ；含3.6kb质粒的细胞颜色为    ．
              （2）若将两段分别用限制酶BamHI和BglHI切开的单个目的基因片段置换pZHZ11中0.5kb的BamHI酶切片段，形成4.9kb的重组质粒，则目的基因长度为    kb．
              （3）上述4.9kb的重组质粒有两种形式，若用BamHI和EcoRI联合酶切其中一种，只能获得1.7kb和3.2kb两种DNA片段；那么联合酶切同等长度的另一种重组质粒，则可获得    kb和    kb两种DNA片段．
              （4）若将人的染色体DNA片段先导入大肠杆菌细胞中克隆并坚定目的基因，然后再将获得的目的基因转入植物细胞中表达，最后将产物的药物单独注入小鼠体内观察其生物功能是否发挥，那么上述过程属于    ．
              A．人类基因工程   B．动物基因工程     C．植物基因工程   D．微生物基因工程．
              难度：中等
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            • 3． 以下哪一个步骤是基因工程的核心（　　）
              A．目的基因的获取
              B．基因表达载体的构建
              C．将目的基因导入受体细胞
              D．目的基因的检测与鉴定
              难度：较易
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            • 4． 油菜由白菜（2n=AA=20）和甘蓝（2n=CC=18）天然杂交进化而来，如何在短时间内提高油菜籽的产油率、改善油菜籽的品质是科学家研究的热门话题．请分析回答下列问题：
              （1）在利用植物体细胞杂交技术将白菜和甘蓝体细胞融合前，需用    除去各自的细胞壁，常用化学促溶剂    促进二者融合成杂种植物细胞．在由杂种植物细胞生成再生植株的过程中，细胞内最多含有    个染色体组．
              （2）研究发现，油脂的生成量与蛋白质的合成量呈反相关，主要控制基因（独立遗传）及代谢路径如图1．
               ①叶肉细胞中的丙酮酸主要来自    ．
               ②高油油菜的基因型为    ．基因型为MmNn的油菜自交，后代中宜于留种的纯合高油油菜占    ．
              （3）油酸为不饱和脂肪酸，能降低人体血液中胆固醇、减少患心血管病风险．F基因控制合成的油酸酯氢酶催化油酸形成饱和脂肪酸，转反义F基因油菜能提高菜籽油中油酸含量．
              ①利用油菜细胞的染色体DNA直接获取大量F基因的方法为    ．
              ②构建反义F基因表达载体时，需要    酶；将反义F基因表达载体导入油菜根细胞的方法除基因枪法外，还可利用    ．从图2看出，构建反义F基因表达载体时没有设计标志基因，目的是    ．
              ③Le启动子为种子特异性启动子，将F基因反向连接在Le启动子之后构建了反义F基因．检测转反义F基因油菜细胞内F基因转录的mRNA含量，结果表明，因杂交形成双链RNA，细胞内F基因的mRNA水平下降．由此推测，反义F基因的转录抑制了F基因的    （填复制、转录或翻译）过程．若F基因转录时，两条单链（a1、a2）中a1为转录的模板链，推测反义F基因转录时的模板链为    ．
              难度：中等
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            • 5． 为检测目的基因是否导入受体细胞，适合采用的方法为（　　）
              A．分子杂交
              B．抗原-抗体杂交
              C．DNA分子杂交
              D．抗虫抗病检测
              难度：中等
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            • 6． 精子载体法是以精子作为外源基因的载体，使精子携带外源基因进入卵细胞受精形成受精卵，在体外培养成胚胎后移入代孕母体，从而获得转基因动物．请回答下列问题．
              （1）将目的基因导入精子之前需要构建基因表达载体，基因表达载体包括目的基因、    ．目的基因导入精子的方法常用    ．
              （2）外源基因能够整合到精子的    上是提高转化率的关键，因为受精时只有精子的    才能进入卵细胞中，受精之前需要对精子进行    处理．
              （3）胚胎移植时，受体应处于适合的生理状况，此时可利用激素对受体进行处理，一般采用的激素是    ．此外，受体对移入子宫的外来胚胎    ，这为胚胎在受体内的存活提供了可能．
              难度：中等
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            • 7． 下列把目的基因导入受体细胞的描述不正确的是（　　）
              A．导入单子叶植物细胞常用农杆菌转化法
              B．导入大肠杆菌常用Ca2+处理细胞
              C．导入动物乳腺细胞中即可获得乳腺生物反应器
              D．花粉管通道法是一种十分简便经济的方法
              难度：中等
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            • 8． 将目的基因导入玉米茎尖分生区细胞和小鼠受精卵，应分别采用的方法是（　　）
              A．显微注射法 农杆菌转化法
              B．基因枪法 花粉管通道法
              C．农杆菌转化法 农杆菌转化法
              D．基因枪法 显微注射法
              难度：中等
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            • 9． 科研人员通过基因工程实现了β-甘露聚糖酶基因在猪肠道野生酵母菌中的表达，使原来不能被猪利用的粗纤维在猪肠道内被分解成可直接吸收的单糖．如图为构建工程菌的部分过程，其中介导序列能引导载体整合到酵母菌的染色体DNA上．请回答：

              （1）①过程中需要的工具酶是    ，②③过程中需要的工具酶是    ．
              （2）同尾酶是指切割DNA分子后能产生相同黏性末端的限制酶，图中4种限制酶中属于同尾酶的是    ．
              （3）重组表达载体中的介导序列引导目的基因整合到酵母菌的染色体DNA上，其意义在于    ．
              （4）①过程从野生酵母菌染色体DNA中PCR扩增介导序列时，科研人员设计了如下一对引物：GAATTCGACCTCAAATCAGGTAGG和TTGCATTGACTTACACCTAGG，其中下划线部分序列的设计依据是    ，方框部分序列的设计目的是    ．
              （5）对重组表达载体进行酶切鉴定，假设所用的酶均可将识别位点完全切开．若使用EcoRⅠ和SalⅠ酶切，得到    种DNA片断．若使用EcoRⅠ和BamHⅠ酶切，得到    种DNA片断．
              难度：中等
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            • 10． 目前第二、三代病毒疫苗的研制是基于DNA重组技术而建立的．请分析回答下列问题：
              （1）第二代疫苗是以编码病毒抗原蛋白的RNA为模板，经    酶的作用获得目的基因，再利用    等工具酶构建基因表达载体．
              （2）要将重组质粒导入大肠杆菌，应先用    处理大肠杆菌，使大肠杆菌转变为    态；再将    在缓冲液中混合培养完成转化过程．
              （3）第三代疫苗即“DNA疫苗”是将编码某种抗原蛋白的DNA注射到动物体内，该DNA可在生物体内    出相应的抗原蛋白．
              （4）对于基因工程产品安全性的争论越来越激烈，目前转基因生物的安全性主要体现在食物安全方面、    和    三个方面．
              难度：中等
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