“生物导弹”可用于杀死人类某些癌细胞。制备“生物导弹”是单克隆抗体的重要应用之一，其过程如下图所示：

（1）在①-⑤批量生产A蛋白抗原的过程中，要快速获得大量的Ａ基因可采用       技术，在该技术中，解旋的方法是       ；过程③所用的方法是          ；④过程一般选择发育良好的                   ，移植到受体牛的子宫中。

（2）在⑥-⑨批量生产生物导弹的过程中，⑦过程所用的“脾脏中的细胞”为          。

⑦过程区别于植物体细胞杂交技术所特有的诱导因素是           ，要得到所需的杂交瘤细胞要经过   次筛选，最终筛选出的杂交瘤细胞的特点是                  。

如图为细胞融合的简略过程，请据图回答：

( 1)若A、B是植物细胞，在细胞融合之前已用___________________处理，除去_____________；A、B到细胞C的过程中，常用的物理方法是__________________________。融合完成的标志是_______________.

(2)若A、B是植物细胞，则形成的D细胞还应用______________技术把D培养成植株。

(3)若A、B是动物细胞，一般用___________________（酶）使其分散开来，A、B到C的过程中，常用的不同于植物细胞的手段是____________________，所形成的D称为____________________。

(4)若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠B淋巴细胞，那么，在获得此细胞之前，小鼠已被注射了___________，注射后小鼠身体产生了相应的____________生成了___________。图中B为_________________。

(5)若该过程仍是制备单克隆抗体，在A、B到C的过程中，所形成的C有______种，（只考虑细胞两两融合）用来培养的D的细胞应该是_____________，它有什么特点？________________________________________________________________，获得D后，常用的培养方法是______________和________________。

【选修3】《现代生物科技专题》

（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式——________和____________。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择________(相同或不同)限制酶进行切割。

（2）利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是：它是                       的位点，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需要的蛋白质。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用________处理大肠杆菌，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的         基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为________。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成人胰岛素，常用______________技术。

（3）如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的________中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的________上。

Ⅱ．请根据材料回答下列问题。

单克隆抗体在医疗、诊断等方面发挥着越来越重要的作用。英国科学家米尔斯坦和柯勒设计了一个用被免疫的B淋巴细胞制备单克隆抗体的实验，图示其实验流程，请回答。

（1）a是               ，b是                ①过程是                      ，②表示在              上进行培养。③过程包括了体外培养和                    。

（2）制备单克隆抗体时，选择B淋巴细胞的原因是                             。

（3）如何判断经过②后的细胞就是杂交细胞                                   。   

（4）诱导动、植物细胞融合常用的一种化学诱导剂是                    ，植物体细胞杂交之前还需用                          去除细胞壁，植物体细胞杂交技术在一定程度上解决了杂交育种的                               问题。

有性生殖的生物产生后代需进行受精作用，植物体细胞杂交要进行原生质体的融合，单克隆抗体的制备需进行动物细胞融合，可见细胞的融合技术有着广泛的应用。下图为细胞融合的简略过程，据图回答相关问题：

（1）若a、b表示哺乳动物雌雄生殖细胞，则两细胞融合的场所是               ， 融合的基本原理是               。

（2）若a、b表示两种植物体细胞，其原生质体制备过程中使用的酶液中含有多种酶，其中必需含有               酶。由d细胞形成杂种植株的原理是               ，这种育种方法的优点是               。

（3）若a、b分别为骨髓瘤细胞和浆细胞，使两细胞融合的诱导因素有               ，融合形成的d细胞的特点是              。由d细胞产生的抗体与普通血清抗体比较，具有             的特点。  

 （1）基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：第一步是目的基因的获取，第二步是基因表达载体的构建，第三步是将目的基因导入受体细胞，第四步是          ▲         

①通常在第一步和第二步的操作中需要相同的工具酶是          ▲           

②利用PCR技术扩增目的基因的过程中，目的基因受热形成单链并与引物结合，在   ▲     酶的作用下延伸形成DNA。

③采用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞后，培养该细胞再生成植株的过程中，往往需要使用植物激素，人为地控制细胞的           ▲          。

④如果转基因植物的花粉中含有毒蛋白，将引起的安全性问题包括     ▲            （多选）。

    A．生物安全  B．环境安全    C．食品安全    D．伦理道德问题

⑤蛋白质工程的基本原理是：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的        ▲            序列，所以蛋白质工程实质是对基因直接操作的。

（2）请回答下列有关单克隆抗体制备的问题：

①与动物细胞融合过程相比，植物体细胞杂交在细胞融合之前要用    ▲      ，以获得原生质体。

②骨髓瘤细胞和产生免疫反应的动物的脾脏细胞中的B淋巴细胞融合时，由于可能产生多种融合细胞，因此还需对融合细胞进行            ▲        ，且要适时克隆化培养。

（3）请回答下列有关胚胎工程的问题：

   ①在胚胎移植过程中，供、受体母牛选择好后，要用激素进行同期发情处理的原因是       ▲        ，

     以保证移植的胚胎能够继续正常发育。

   ②人类的胚胎发育过程中，细胞分化开始于    ▲        阶段。

疾病的诊断与治疗过程中，经常使用单克隆抗体。回答问题：

(1)单克隆抗体是由杂交瘤细胞产生的，杂交瘤细胞具有的特点是________。体外培养杂交瘤细胞，首先应保证其处于________的环境，其次需要提供充足的营养和适宜的温度，培养箱中充入二氧化碳的作用是________。

(2)单克隆抗体在诊断疾病的方面上具有________的优点；在治疗癌症方面可制成________治疗癌症。

(3)科研工作者欲对单克隆抗体进行改造，生产出效果更好的嵌合抗体，用于治疗疾病。用蛋白质工程技术对单克隆抗体进行改造时，首先必须根据预期________，设计嵌合抗体的结构。最终通过基因拼接，将抗体基因改造成嵌合抗体基因，然后导入到淋巴细胞中表达。检测该基因在淋巴细胞中是否翻译成蛋白质．可使用________技术。

科学家通过对鼠和人控制抗体产生的基因进行拼接，实现了对鼠源杂交瘤抗体的改造，生产出对人体的不良反应减少、效果更好的鼠一人嵌合抗体，用于癌症治疗。如图表示形成鼠一人嵌合抗体的过程。请据图回答：

(1)鼠源杂交瘤抗体就是从免疫小鼠的脾脏细胞中获取B淋巴细胞，在诱导剂的作用下与             融合，形成杂交瘤细胞，并

通过体内培养或体外培生产单克隆抗体。这种抗体与普通血清抗体相比较，最主要的优点在于它的             ，可大量制备。

(2)与植物原生质体的融合相比，动物细胞融合在诱导融合方面的主要区别是还常用             诱导融合。

(3)生产单克隆抗体一般不直接培养B淋巴细胞，主要原因是             。人体内的抗体中             细胞合成分泌的。

(4)科学家通过基因拼接，将鼠源抗体基因改造成鼠一人嵌合抗体基因，然后导入到鼠淋巴细胞中，这个过程中用到的工具酶有             、             ，改造抗体属于             工程的范畴。

（1）将_______注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细胞，其中至少1个淋巴细胞能产生抗该抗原的抗体。

 （2）在单克隆抗体制备过程中之所以选用B淋巴细胞核骨髓瘤细胞，是因为它们融合的杂交瘤细胞具有______________________的特性。

（3）单克隆抗体制备过程运用了动物细胞培养和动物细胞融合的细胞工程技术手段。动物细胞培养的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，与植物细胞培养基有所不同的是，还含有__________________。在动物细胞融合过程中，需要将所选取的组织细胞分散开，以利于细胞融合，可用_______处理组织细胞使之分散开。

（4）鼠源杂交瘤抗体与普通血清抗体相比较，具有_________________的特点。

（5）改造鼠源杂交瘤抗体，生产鼠-人嵌合抗体，属于蛋白质工程的范畴，图示过程是根据预期的___________设计___________ 最终必须对基因进行操作。

(1) 在操作一中，为了使细胞彼此分离，通常是先用剪刀剪碎组织，再用胰蛋白质酶或胶原蛋白酶将细胞分开。研究表明胶原蛋白酶和胰蛋白酶在消化时的机制有差异，下表为两种酶活性的比较表。

据表中信息可知胰蛋白质酶作用时间需限制在0.5～2小时，原因是                          ，为了控制胰蛋白酶的消化作用时间，常向溶液中直接加入                   即可使酶灭活而终止消化。操作一的原理是                      。

(2) 动物细胞培养液配制好后，通常还要先抽取少许放入培养瓶中，置于37℃、CO₂培养箱中24小时后观察，这样做的目的是                          。

(3)科研人员研究发现某一种抗原刺激机体后，在鼠体内可发现有多种效应B细胞都可产生针对于该特定抗原的抗体，这些抗体混合在一起即为多克隆抗体。试从抗原结构的角度分析产生该现象的原因是                              。

(4)操作三中，②过程的筛选使用的是       培养基，目的是获得           。③过程的筛选是为了得到                     。

人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘产生的一种激素，图是制备抗HCG单克隆抗体的过程，请回答相关问题：

(1)注射的X物质是________，可从小鼠最大的免疫器官中获取B淋巴细胞，这个器官的名称是________。能用于动物细胞促融，但不能用于植物细胞促融的方法是________。

(2)该实验不直接培养B淋巴细胞的原因是________。细胞融合会出现多种情况，其中能在选择培养基中生长的两两融合的细胞是________，选择培养过程使用的培养基应是________(填“固体”或“液体”)培养基。

(3)专一抗体的检测往往需要反复多次进行，可能的原因是________。由图示过程最终得到的丙细胞应该具有的两个特点是________。