【选修3】《现代生物科技专题》

（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式——________和____________。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择________(相同或不同)限制酶进行切割。

（2）利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是：它是                       的位点，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需要的蛋白质。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用________处理大肠杆菌，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的         基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为________。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成人胰岛素，常用______________技术。

（3）如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的________中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的________上。

Ⅱ．请根据材料回答下列问题。

单克隆抗体在医疗、诊断等方面发挥着越来越重要的作用。英国科学家米尔斯坦和柯勒设计了一个用被免疫的B淋巴细胞制备单克隆抗体的实验，图示其实验流程，请回答。

（1）a是               ，b是                ①过程是                      ，②表示在              上进行培养。③过程包括了体外培养和                    。

（2）制备单克隆抗体时，选择B淋巴细胞的原因是                             。

（3）如何判断经过②后的细胞就是杂交细胞                                   。   

（4）诱导动、植物细胞融合常用的一种化学诱导剂是                    ，植物体细胞杂交之前还需用                          去除细胞壁，植物体细胞杂交技术在一定程度上解决了杂交育种的                               问题。

下图为细胞融合的简略过程示意图，请据图完成问题：

（1）若A、B是植物细胞，在细胞融合之前已用酶处理去掉了细胞壁，所用的酶可能是_________，由此生成的Ａ和Ｂ称为_________；A、B到细胞C的过程中，常用的物理方法有离心、振动、电激。融合完成的标志是________。

（２）若A、B是动物细胞，一般取自幼龄动物的器官、组织，然后用________使其分散开来；A、B到C的过程中，常用的不用于植物细胞工程的方法是用______________诱导细胞融合。对融合得到的D进行大规模培养时需要提供的气体环境为______________，其中CO2的作用是                                                            _。此外，培养液还应进行无菌处理，通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防​                           。

（３）若Ａ为骨髓瘤细胞，Ｂ为经免疫的Ｂ淋巴细胞，那么Ｄ称为_________，这种细胞既能大量繁殖，又能产生_________。

（４）从A、B到细胞C的过程中，可形成__________种类型的细胞（仅考虑两个细胞间的融合）。若该过程用于单克隆抗体的制备，应筛选出符合要求的Ｄ，方法是用特定的__________培养基培养，为了大规模的生产单克隆抗体，还需对D进行第二次筛选，第二次筛选的目的是____________________。

（1）图甲和图乙所示的过程中，都必须用到的动物细胞工程技术手段是________。

（2）图甲中②过程常在________促融剂诱导下完成，③过程中至少涉及两次筛选；第一次利用________进行初步筛选，第二次利用________的方法筛选出既能大量增殖，又能产生单一性抗体的杂交瘤细胞。④过程与体外培养相比，其优点是________。

（3）单克隆抗体结合上抗癌药物能定向攻击癌细胞，这一应用可形象地称为________。

（4）图乙过程的技术具有多种用途，但是不能________。

A．有选择地繁殖某一性别的家畜        B．繁殖家畜中的优良个体

C．用于保存物种                      D．改变动物的核基因

（5）在目前现有技术条件下，还不能将从动物体内分离出来的成熟的体细胞直接培养成一个新个体，而是必须将体细胞的细胞核移植到去核的卵细胞中才能发育成新个体，你认为原因最可能是________。

A．卵细胞大，便于操作                            B．卵细胞含有的营养物质多

C．卵细胞细胞质可使体细胞核全能性得到表达        D．重组细胞才具有全能性

下列与实验相关的叙述中正确的是

下图表示抗人体胃癌的单克隆抗体的制备过程。下列叙述不正确的是

[生物—选修3：现代生物科技专题]

某研究者用抗原(A)分别免疫3只同种小鼠(X、Y和Z}，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价(能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数)，结果如下图所示甲

若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞(染色体数目40条)，并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞(染色体数目60条)按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检侧，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。回答下列问题：

⑴制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到1600以上，则小鼠最少需要经过          次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这三只免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是     小鼠 ，理由是_      。

⑵细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未触合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有           ，体系中出现多种类型细胞的原因是                  。

⑶杂交瘤细胞中有            个细胞核，染色体数目最多是     条。

⑷未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是_                                                                                 。

下图为制备单克隆抗体的流程图，据图回答下列问题。

(1)传统制备抗体的方法是向动物体内反复注射某种抗原，再从动物的                 分离所需抗体。与之相比图示方法制备的单克隆抗体的优点是              。由图中可看出，该过程涉及的动物细胞工程技术有                  。

(2)图示过程中，如果仅考虑细胞的两两融合，其融合细胞有                      种类型。

(3)图中需要两次筛选，其中第一次筛选时所用的培养基是特定的                  培养基。目的是                  。在培养基中添加动物血清，原因是               。为了防止细胞培养过程中积累的代谢产物对细胞造成伤害，应定期                  。单克隆抗体可用于制成“生物导弹”。用“生物导弹”治疗癌症的优点是                         。

    （1）a过程为从小鼠的_______________中提取抗体；经b、c、d过程获得抗体相对于a过程获得抗体的优势是____________。

    （2）b过程一般从小鼠的________（器官）中分离免疫细胞，甲试管中的免疫细胞是_________。

    （3）乙管内的细胞为鼠瘤细胞，若甲管中只有4种细胞，且只考虑细胞的两两融合，可有_____种融合细胞。过程c需使用特定的选择培养基进行筛选，分离获得丙试管中细胞的特点是__________。

    （4）d过程是对丙试管中的细胞进行______________和______________，以获得足够数量的能够分泌抗CD3特异性抗体的细胞。

（5）将能分泌抗CD3抗体的杂交瘤细胞在体外培养，或注射到小鼠腹腔内，分别从______或小鼠的______中提供取可得到大量单克隆抗体。