科学家通过利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，提高了光合作用过程中Rubisco酶基因对CO₂的亲和力，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：

（1）PCR过程所依据的原理是                           ，该过程需要加入的酶是          。利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成          。

（2）该技术不直接改造Rubisco酶，而通过Rubisco酶基因进行改造，从而实现对Rubisco酶的改造，其原因是                           。和传统基因工程技术相比较，定点突变最突出的优点是获得的产物一般是自然界中             （填“存在的”或“不存在的”），PCR定点突变技术属于         工程的范畴。

（3）可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用                法将基因表达载体导入植物细胞，将该细胞经植物组织培养技术培育成幼苗，从细胞水平分析所依据的原理是                        。

[选修3——现代生物科技专题]

科学家从某细菌中提取抗冻基因，转入番茄并培育出抗冻番茄。下图是转抗冻基因番茄的培育过程，含抗冻基因的DNA片段和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。分析回答问题：

（1）若要获得抗冻基因，可以从细菌中提取，也可以通过分析抗冻蛋白________的序列推测基因的结构，进而人工合成抗冻基因。对获得的抗冻基因可用________技术进行扩增。

（2）上述两种途径获得的抗冻基因________（填“一定”或“不一定”）相同，原因是________。

（3）用图中的质粒和抗冻基因构建重组质粒，不能使用SmaⅠ酶切割，原因是________。图中①②过程为防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，应选用________酶对外源DNA、质粒进行切割。

（4）图中过程⑤表示________。

青蒿素是从黄花蒿茎叶中提取的抗疟疾药物。通过组织培养获得青蒿素的途径如图所示。请回答：

 （1）图中①和②分别表示黄花蒿组织培养过程中细胞的________和________过程。

（2）配制生芽培养基时生长素比细胞分裂素的比值应较________（填“高”或“低”）。配制培养基时通常加入凝固剂________。配制后还须用________法对培养基进行灭菌。外植体在接种前通常可用体积分数为________的酒精进行消毒。

（3）为了得到高产细胞系，通常要用酶解法获得原生质体，用________酶和________酶在0.5～0.6moVL的________溶液环境（较高渗透压）下去壁。

（4）科研人员利用转基因技术用细菌作为工程菌获得青蒿素的前体青蒿酸。先将目的基因与含有抗青霉素基因的质粒形成________，再与细菌菌液混合导入目的基因。用玻璃刮刀将稀释后的菌液用________法接种到含________的固体培养基上，经培养形成________，再进一步筛选和培养。若最终能从细菌中提取到________，则说明转基因成功。

（1）选取黄花蒿的茎段后，通常先用体枳分数为70%的酒精等药品对外植体进行__________ 。

（2）与微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方中最明显的区别是需提供__________ 。MS培养基的灭菌方法是__________法。

（3）黄花蒿的组织培养研究中__________ （填"需要”或“不需要”）做重复实验，实验中可以取用一个经过灭菌的只装有培养基的锥形瓶与接种操作后的锥形瓶一同培养，用来证明____________________。

（4）在植物组织培养中常用到生长素和细胞分裂素。若要达到使细胞既分裂也分化的结果，两类激素的使用顺序应当是______________________________。如果已经长出丛芽，最好同时使用上述两类激素，且生长素与细胞分裂素用量的比值__________（填“高”、“低”或“适中”）时，则有利于下一步的培养。

（5）有人在培养基中添加秋水仙素以诱导黄花蒿茎段细胞发生染色体数目変异，则秋水仙素的作用时期是有丝分裂的__________期。

(1)植物的花药培养在育种上有特殊意义。月季的花粉发育要经历若干个时期。在进行花药离体培养时选材非常重要。一般来说，在单核期花药培养的成功率最高，为了选择该时期的花药，通常选择________________________的花蕾。确定花粉发育时期最常用的方法有________________法；但对于花粉细胞核不易着色的情况，需采用________________法。

(2)培养液中蔗糖的作用是________和________。与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需要植物激素，这些植物激素一般需要事先单独配制成________________保存备用。

(3)柑橘组织培养的操作程序是：①制备MS固体培养基；②________________；③接种；④培养；⑤________________；⑥栽培。

（1）与传统的杂交育种相比较，通过基因工程育种具有明显的优势，一方面能   ▲   ，另一方面能   ▲   。

（2）图中步骤①是基因工程的核心步骤，其构建“重组质粒”的目的是   ▲   。

（3）限制酶BamHⅠ的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，在土壤农杆菌Ti质粒上有该酶的一个切点。一个Ti质粒分子经BamHⅠ切割前后，分别含有   ▲   、   ▲   个游离的磷酸基团。Ti质粒被限制酶BamHⅠ切割后所形成的黏性末端是   ▲   。

（4）步骤④所依据的原理是   ▲   。如在该过程中，愈伤组织在诱导生根的培养基中未形成根，但分化出了芽，其原因可能是   ▲   。

（1）图中a、b所示获得目的基因的方法是          。

（2）据图分析，在构建c的过程中，需用               (填“限制酶Ⅰ”或“限制酶Ⅱ”)切割目的基因，为检验重组质粒是否导入受体细胞，需要利用的标记基因是             。（3）过程e运用了细胞工程中的                     技术，该技术的理论依据是        。

(4)若希望该转基因水稻生产的“金色大米”含维生素A含量更高、效果更好，则需要通过              工程手段对合成维生素A的相关目的基因进行设计