[生物——选修3：现代生物科技专题]

   白菜、甘蓝均为二倍体，体细胞染色体数目分别为20、18。“白菜—甘蓝”是用细胞工程的方法培育出来的蔬菜新品种，它具有生长期短、耐热性强和易于储藏等优点。下图是“白菜—甘蓝”的杂交过程示意图，回答以下问题：

（1）为了得到原生质体需先用________和________来处理白菜细胞和甘蓝细胞；

（2）诱导原生质体融合的方法有多种，常用的物理方法是________，融合完成的标志是________。由杂种细胞得到白菜—甘蓝还需要经过组织培养技术，其中需要避光培养的步骤是________。

（3）上图通过植物体细胞杂交技术获得的“白菜—甘蓝”体细胞染色体数为_____；通常情况下，白菜和甘蓝有性杂交是不能成功的，原因是________，若对白菜和甘蓝采用杂交育种方法能成功的话，得到的后代应含________条染色体。

（4）植物体细胞杂交技术和传统杂交技术相比的优点是________。

【选修3】《现代生物科技专题》

（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式——________和____________。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择________(相同或不同)限制酶进行切割。

（2）利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是：它是                       的位点，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需要的蛋白质。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用________处理大肠杆菌，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的         基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为________。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成人胰岛素，常用______________技术。

（3）如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的________中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的________上。

Ⅱ．请根据材料回答下列问题。

单克隆抗体在医疗、诊断等方面发挥着越来越重要的作用。英国科学家米尔斯坦和柯勒设计了一个用被免疫的B淋巴细胞制备单克隆抗体的实验，图示其实验流程，请回答。

（1）a是               ，b是                ①过程是                      ，②表示在              上进行培养。③过程包括了体外培养和                    。

（2）制备单克隆抗体时，选择B淋巴细胞的原因是                             。

（3）如何判断经过②后的细胞就是杂交细胞                                   。   

（4）诱导动、植物细胞融合常用的一种化学诱导剂是                    ，植物体细胞杂交之前还需用                          去除细胞壁，植物体细胞杂交技术在一定程度上解决了杂交育种的                               问题。

基因工程和植物细胞工程技术在科研和生产实践中有广泛应用，请据图回答：

(1)①②过程采用最多的是农杆菌转化法，原因是农杆菌中Ti质粒上的________可转移到受体细胞并整合到受体细胞的_______上；检测目的基因是否导入受体细胞可用DNA分子杂交技术，要用__________作探针。

(2)图中③④过程须在无菌条件下进行，培养基中除加入营养物质外，还需添加________等物质，作用是____________________。

(3)若要获取转基因植物人工种子，需培养到________阶段，再进行人工种皮的包裹；如用植物细胞实现目的基因所表达的蛋白质类药物的工厂化生产，培养到_______阶段即可。

(4)若采用植物体细胞杂交技术获得新的植物体，细胞间杂交一般采用________作为诱导剂诱导细胞融合，与传统的有性杂交相比，其优是______。

花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图。

（1）过程①所需的酶是                       。

（2）过程②后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的             存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。

（3）原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是              。原生质体经过             再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。

（4）采用特异性引物对花椰菜和黑芥基因组DNA进行PCR扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株1—4进行PCR扩增的结果。据图判断，再生植株1—4中一定是杂种植株的有                    。

（5）对杂种植株进行                 接种实验，可筛选出具有高抗性的杂种植株。

(1)植物体细胞杂交的第①步是去掉细胞壁,分离出有活力的原生质体。目前此步聚最常用的方法是酶解法，也就是在温和的条件下用            等分解植物的细胞壁。

(2)人工诱导②过程原生质体融合的物理方法是：利用          等（至少写出两种）促使原生质体融合；化学方法是用    等试剂作为诱导剂诱导融合。动物细胞融合与植物原生质体融合的诱导方法类似，动物细胞的融合还常用到         作为诱导剂。

(3)③表示融合后的原生质体再生细胞壁，新细胞壁的产生与细胞内      (细胞器)有密切关系。

(4)图中④过程表示          ，⑤过程表示           ，由杂种细胞生长成杂种植株所依据的原理是               。

(5)植物体细胞杂交在育种工作中具有广泛的应用价值，其突出的优点是         。

(1)自然界中马铃薯和茄子间存在___________，难以通过有性生殖产生后代。

(2)科研人员将马铃薯和茄子的叶片用_______酶分解处理，获得有活力的原生质体。将马铃薯和茄子的原生质体融合，融合细胞在培养基中培养，培养基中需要加入_______，促进形成愈伤组织和再分化形成杂种植株。

(3)科研人员从PCR鉴定为阳性的杂种植株中选出杂种植株B，用流式细胞仪进一步测定二倍体马铃薯、二倍体茄子和杂种植株B的DNA相对含量结果如下图。

依据上述结果预测，马铃薯—茄子四倍体融合细胞的DNA相对含量约为___________。据图中结果推测，杂种植株B应为___________倍体，判断依据是___________。

(4)取杂种植株B的根尖制成临时装片，进一步从染色体水平进行鉴定。在显微镜下找到有丝分裂______期的细胞，观察并统计来自茄子和马铃薯的染色体数目，若______，则支持上述推测。

(5)为确定杂种植株是否符合育种要求，还需对其进行___________检测。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

如图所示为科学家利用番茄（2N）叶细胞和马铃薯（4N）叶细胞杂交培育“番茄—马铃薯”植株的过程，请回答下列问题。

⑴获得a、b所选用的酶为                       ，c和d的名称依次是                       、                        。

⑵图示技术名称是                       ；由d培育成植株的过程运用的技术手段是                       ，其依据的原理是                       。

⑶过程②称为                       ，所用的化学诱导剂一般是                       ，③过程成功的标志是                       。

⑷过程④是                       ，⑤过程增殖的方式为                       ，诱导f中植株生根过程中培养基中生长素与细胞分裂素的比值较④过程         （高/低）；最终获得的 “番茄—马铃薯”属于                 倍体植株。

有性生殖的生物产生后代需进行受精作用，植物体细胞杂交要进行原生质体的融合，单克隆抗体的制备需进行动物细胞融合，可见细胞的融合技术有着广泛的应用。下图为细胞融合的简略过程，据图回答相关问题：

（1）若a、b表示哺乳动物雌雄生殖细胞，则两细胞融合的场所是               ， 融合的基本原理是               。

（2）若a、b表示两种植物体细胞，其原生质体制备过程中使用的酶液中含有多种酶，其中必需含有               酶。由d细胞形成杂种植株的原理是               ，这种育种方法的优点是               。

（3）若a、b分别为骨髓瘤细胞和浆细胞，使两细胞融合的诱导因素有               ，融合形成的d细胞的特点是              。由d细胞产生的抗体与普通血清抗体比较，具有             的特点。  

[生物——选修3：现代生物科技专题]

下图是利用现代生物技术改良植物品系的过程。

（1）请写出图中涉及的现代生物技术：________。

（2）①中细胞融合的原理是________，诱导其融合的常用化学诱导剂是________。

（3）融合后的原生质体经过________再生，进而经过③________形成愈伤组织。

（4）④过程的实质是________，某同学在操作时发现细胞只分裂而不分化出芽和根，可能原因是________。

（5）如最终获得的杂种植株需要通过制作人工种子的方法来大量繁殖，经④得到的________等材料用人工薄膜包装后可得到人工种子。

[生物——选修3：现代生物科技专题

I.白菜与甘蓝均为二倍体，染色体数分别为20与18。科学家利用植物体细胞杂交技术培育出的“白菜—甘蓝”，具有生长期短、耐热性强和易于储藏等优点。回答下列问题：

(1)为了培养“白菜—甘蓝”，可取两者的叶片，先用________________酶去除细胞壁，获得具有活力的__________，再用化学诱导剂诱导二者融合。形成的融合细胞进一步培养形成_愈伤组织，然后经过再分化形成完整的杂种植株。

(2)白菜、甘蓝有性杂交的后代是不育的，而上述杂种植株是可育的，造成这种差异的原因是在减数分裂过程中前者____________异常而后者正常。

(3)这种杂种植株可通过制作人工种子的方法来大量繁殖。经植物组织培养得到的____________等材料用人工薄膜包装后可得到人工种子。

II.下图表示用基因工程与胚胎工程培育良种牛的过程，请据图回答下列问题：

(1)④表示基因工程中______________________过程。

(2)良种奶牛用促性腺激素处理的目的是____________。

(3)图中A指______________，B指______________。

(4)如果转基因牛D的牛奶中含有________________，则说明血清白蛋白基因在个体水平已表达成功。