“探究”是高中生物学习的重要内容，是以设计实验和进行实验为核心的实践活动。请回答下列问题：

（1）探究酵母菌在氧气充足条件下不能进行酒精发酵的原因是氧气抑制了酵母菌的无氧呼吸，还是有氧呼吸产生的ATP抑制了酵母菌的无氧呼吸的实验：

材料用具：锥形瓶、含酵母菌的培养液（试剂1）、酵母菌破碎后经离心处理得到的只含有酵母菌细胞质基质的上清液（试剂2）和只含有酵母菌细胞器的沉淀物（试剂3）、质量分数5%的葡萄糖溶液、ATP溶液、蒸馏水、橡皮管夹若干、其他常用器材和试剂。

实验步骤：

①取锥形瓶等连接成如上图所示的装置三套，依次编号为A、B、C，设定A套为对照组。锥形瓶1中都加入等量的质量分数为10%的NaOH溶液，锥形瓶3中都加入等量的澄清的石灰水。

②A装置的锥形瓶2中加入    ；B装置的锥形瓶2中加入10 mL试剂2、10 mL质量分数5%的葡萄糖溶液、2 mL ATP溶液；C装置的锥形瓶2中加入10 mL试剂2、10 mL质量分数5%的葡萄糖溶液、2 mL蒸馏水。

③A、B、C三套装置均先持续通入氮气1 min，除去锥形瓶中的氧气，再将A、B、C三套装置分别作如下处理：A套持续通入氮气，B套持续通入  ▲  ，C套持续通入    。

④将三套装置放在相同且适宜条件下培养10 h。

⑤观察    ，判断酵母菌是否进行无氧呼吸。

（2）探究二氯二乙胺能否抑制癌细胞增殖的实验：

材料用具：肝部长有肿瘤的小鼠，不同浓度的二氯二乙胺溶液，蒸馏水，生理盐水，含有全部营养物质的细胞培养液，显微镜，血球计数板，试管，吸管等。

实验步骤：

a.取洁净的培养皿一个，加入适量培养液，从小鼠肝部切取肿瘤组织，剪碎，并用胰蛋白酶处理，使其分散开来，置于培养皿中培养；

b.取洁净的试管5支，加入等量培养液，编号1、2、3、4、5，并在1～4号试管中加入等量的不同浓度的二氯二乙胺溶液，5号试管中加入    ；

c.从培养皿中吸取等量的培养液置于1～5号试管中，振荡后，在适宜条件下培养—段时间；

d.从静置的5支试管中吸取适量的培养液置于血球计数板上，在显微镜下计数，记录数据。

实验分析：

①该实验的实验组是    号试管。上述实验步骤d中测量到的数据是否准确，请判断并作出解释：   。

②另有同学按照正确的方法进行实验，得到如下图结果：

根据以上实验结果，你能得出的结论有：二氯二乙胺能抑制癌细胞增殖，且在一定范围内，随二氯二乙胺浓度的增大，抑制作用    。

科学家从哺乳动物早期胚胎中分离出一类胚胎干细胞(ES细胞)，并进一步将ES细胞诱导分化为某些组织细胞。回答下列问题：

(1)胚胎干细胞(ES细胞)可由囊胚的__________________________分离培养获得，其可产生多种多样的细胞的根本原因是__________________。

(2)获得的动物细胞进行培养时，一般需控制在10代以内，原因是__________________________。

(3)离体培养胚胎干细胞时，一般需要在合成培养基中加入____________等天然成分，培养时所需的气体主要有O₂和CO₂，CO₂的主要作用是______________。

(4)研究发现，细胞因子能够调控某动物干细胞分化。放线菌素D能通过阻碍RNA聚合酶的功能进而抑制细胞因子的调控，由此推断该抑制过程发生在____________(填"复制""转录"或"翻译")水平。

(5)研究还发现，胚胎干细胞可以诱导分化为造血干细胞等各种细胞，这体现了胚胎干细胞具有__________________的特点，临床上可用诱导干细胞定向分化的方法修补损伤或衰老的组织器官，从而解决______________问题。

实验小鼠皮肤细胞培养的基本过程如下图所示，根据动物细胞工程的相关知识，回答下列问题：

（1）动物细胞工程常用的技术手段中，________技术是其他动物细胞工程技术的基础，图中过程③为________，过程④为________。

（2）培养瓶的悬液中分散的细胞会贴附在瓶壁上，称为________。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为________。图中“细胞培养Ⅱ”中有少部分细胞会克服细胞寿命的自然极限，获得________，朝着等同于癌细胞的方向发展。

（3）在细胞内DNA合成一般有两条途径，主要途径是在细胞内以糖和氨基酸等为原料合成核苷酸，进而合成DNA，而氨基嘌呤可以阻断此途径。另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经酶催化作用合成DNA，而小鼠骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。利用DNA合成途径不同的特点配制的培养基中添加的________成分具有筛选杂交瘤细胞的作用，筛选出来的杂交瘤细胞还要进行________和抗体检测，才能获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。

用小鼠进行DNA重组研究中形成的“基因敲除”技术，能“敲除”DNA分子上的特定基因。从研究者成功获得如上图所示的“敲除”一个靶基因的胚胎干细胞，到将该细胞培育成“基因敲除”小鼠，运用到的生物技术不包括（ ）

[生物选修3：现代生物技术专题]

图甲是抗寨卡病毒（一种RNA病毒）单克隆抗体制备的过程图，图乙是克隆羊培育过程示意图，请据图回答下列问题：

（1）图甲和图乙所示的过程中，应该都会用到的动物细胞工程技术是____________。

（2）图甲中②过程常需要借助动物细胞融合技术，其过程中动物细胞融合所特有的方法是使用____________诱导细胞融合。

（3）利用基因工程生产寨卡病毒的疫苗时，需要将重组DNA导入细菌细胞中，这一步骤常用的方法是____________。

（4）核移植时受体应选用_____________期的卵母细胞。

（5）在制备单克隆抗体的过程中，进行了两次筛选，第一次筛选是利用HAT______（填“选择”或“鉴别”）培养基，由于骨髓瘤细胞无法在HAT培养基上生存，故只有____________细胞能长期存活；第二次筛选获得____________。

（6）通过上述方法得到的抗体与常规的血清抗体相比最大的优点是______________。

以下为人工合成 reAnti 基因，转入猪成纤维细胞，做成转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：

（1）基因工程的核心是 ________  (用序号回答）

（2）基因工程基本工具之一的限制酶主要从原核生物中分离纯化出来，大多数限制酶的识别序列是由________个核苷酸组成。                                  

（3）在基因工程中使用的载体除质粒外，还有________、噬菌体衍生物等。

（4）目的基因进入受体细胞，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为 ________。                                                                                                                                  

（5）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞后，要通过 DNA 分子杂交技术，  来检测reAnti基因是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的________上。

（6）从猪中取胎儿成纤维细胞，用胰蛋白酶处理，然后进行分散培养。多数细胞生存的适宜 PH 范围是________。

（7）去核前的卵母细胞应培养到________期。其去核后与成纤维细胞通过电刺激后融合，形成重组细胞，再利用物理或化学方法刺激，使之完

成细胞________，在体外培养成重组早期胚胎。

（8）在进行过程⑦操作前，应用激素对受体母猪进行__________处理。

艾滋病病毒(HIV)外壳的包膜上有多种蛋白质，其中包膜糖蛋白(env)基因编码gpl60蛋白，进一步加工成gpl20蛋白，具有较强的抗原性。制备抗HIVgpl20的单克隆抗体，为艾滋病的治疗带来希望。清回答下列问题：

  (1)若利用动物细胞工程制备抗HIVgpl20的单克隆抗体，涉及到的技术手段主要有动物细胞培养技术和________技术。

  (2)细胞融合常用的生物诱导剂是__________。融合后需要用特定的选择性培养基筛选，只有融合的__________才能生长，这种细胞的特点是______________________________。

  (3)若要大量制备该单克隆抗体，可将筛选出来的细胞进行体外培养，在培养液中通入一定浓度的CO₂，主要作用是_______________________________________。

  (4)科研人员设想用基因工程制备能表达抗HIVpl20抗体的重组细胞，获得目的基因可利用PCR技术扩增，需要在反应体系中添加的有机物有__________、模板DNA、Taq酶和4种脱氧核苷酸。利用________法将目的基因导入骨髓瘤细胞。基因工程的核心是______________________。

  (5)现代生物工程技术不仅推动了免疫学的发展，对畜牧业的发展也起到了积极的推动作用。用细胞核移植技术繁育良种牛的过程需要进行胚胎移植，移植前需要对受体牛进行________技术处理，受体对外来胚胎基本不发生____________，为胚胎在受体内的存活提供了可能。

动物细胞培养过程中一定可以出现的情况是（ ）