【加试题】回答下列（一）（二）小题

（一）随着社会的发展，石油产品的使用越来越多，石油烃污染也越来越严重。为了筛选出分解石油烃能力强的微生物，人们不断地进行研究。下图为获取能分离出分解石油烃的微生物的土壤样品后的研究过程，请回答有关问题：

（1）获取土壤样品的取样地点最好选在  。为了能有效地分离出分解石油烃的微生物，过程①④所用的选择培养基只能以石油烃作为唯一碳源,其原因是  。

（2）根据⑤平板上生长的菌落，对④进行接种采用的方法是  ，若发现在⑤中无法区分菌落，可以将图中③取出的菌液    。

（3）纯化菌株时,通常使用的划线工具是  。采用  方法对其进行灭菌。划线的某个平板培养后,第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落,第二划线区域所划的第一条线上无菌落,其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误是  （写出一点即可）。

（二）毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIFⅡ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。

（2）在过程②中，用  酶处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术，叫细胞克隆。未经克隆化的细胞系具有  性。由于人们对动物细胞所需营养物质还没有完全搞清楚，因此在培养细胞时需在培养基中加入一定量的  ，在培养过程中应将培养瓶置于  培养。

（3）若要获得多只相同的转基因山羊，可对图中早期胚胎进行  后进行胚胎移植。

（4）下列有关转基因山羊培育过程的叙述，错误的是  。

A.图中重组细胞的细胞核来自导入目的基因的细胞

B.重组细胞最初分裂时开始进行DNA复制和基因的转录

C.将早期胚胎（如早期囊胚）植入到代孕母羊的输卵管或子宫角部位

D.如果KIFⅡ基因的序列是已知的，则可用化学方法合成或用聚合酶链式反应扩增该基因

【现代生物科技专题】基因疫苗指的是DNA疫苗，即将编码外源性抗原的基因插入到质粒上，然后将质粒直接导入人或动物体内，让其在宿主细胞中表达出抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。口蹄疫是一种危害严重的偶蹄动物传染病，近年来国内外在口蹄疫基因疫苗研究方面有了许多新的突破．回答下列问题：

（1）获取目的基因后，可利用___________技术获得大量该基因，该过程所利用的酶必须具有___________的特点。

（2）将编码外源性抗原的基因插入到质粒上，此过程在基因工程中称作____________。

（3）将导入目的基因的受体细胞在体外培养至________________阶段后进行胚胎移植，选用的受体动物应符合的性别条件是___________。

（4）欲检测人或动物体内是否具有了抗原蛋白，在分子水平上检测的方法是从转基因人或动物中提取蛋白质，进行______________________。

（5）现已经通过基因工程和胚胎工程技术培育出一头具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛，可以采用_______________________技术形成多个重组细胞，经早期胚胎培养获得大量的重组胚胎，再进行____________________就会得到大量具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛。

[生物选修3：现代生物科技专题]

下图是转基因猕猴培育过程示意图，请据图回答：

（1）精细胞经变形后，高尔基体发育形成精子的顶体，顶体内含有的________可直接溶解卵丘细胞之间的物质，也能将透明带溶出一条孔道，协助精子穿过卵母细胞的放射冠和透明带，精子入卵。

（2）哺乳动物排出的卵子发育至________期时，才具备受精能力。

（3）过程①用到的工具酶中能识别特定核苷酸序列的是________。

（4）在体外培养受精卵时，除了给予一定量的O₂以维持细胞呼吸外，还需要提供CO₂气体以维持________。

（5）图中过程⑦称为________，为使代孕雌猴与供体雌猴生殖器官的生理变化相同，此前需要对代孕雌猴做________处理。受体对移入子宫的外来胚胎不会发生________，这为胚胎在受体内的存活提供了可能。

（6）若要同时获得多只与此转基因猕猴相同的小猴，可对早期胚胎进行________，操作时选择发育到桑椹胚或囊胚期的胚胎进行。若选用囊胚期的胚胎，操作过程需要特别注意的问题是________。若要对早期胚胎进行长期保存，应将其置于________条件下。

（1）在获取卵母细胞之前需用促性腺激素对奶牛进行处理，目的是           。

（2）“转基因牛”D培育过程中，常用受精卵作为外源基因的受体细胞，主要原因是受精卵的          高。

（3）图中数字标号①代表的结构为           ，①将来发育为             ，c→d过程需对其       分割。

（4）在培育良种牛的过程中，都运用了动物细胞培养技术．在动物细胞培养过程中，为防止杂菌的污染而要加入一定量的            。

I．采集良种供体奶牛的卵母细胞和精液，通过体外受精，形成受精卵；

II．将人血清白蛋白基因导入奶牛受精卵，形成重组细胞；

III．电脉冲刺激重组细胞促使其形成早期胚胎；

IV．将胚胎移植到受体母牛的子宫中，最终发育成转基因小牛。

请回答下列问题：

（1）一般情况下，良种奶牛所排出的卵子往往数量不足，通 过_____________ 处理可以使其排出更多的卵子。

（2）步骤I中，体外受精前，需要对精子进行_________处理。受精过程中防止多精入卵的生理反应包括____________反应和卵细胞膜反应。

（3）步骤II中，将目的基因导入受精卵最为有效的方法是__________ 。导入前，需要将血清白蛋白基因与奶牛乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，这一步骤属于基因工程操作“四步曲”中的什么步骤？__________________________

（4）实验步骤III中，进行早期胚胎的体外培养时，培养液中除了含有各种无机盐、有机盐类、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外，还要添加激素和_______________。

（5）若需迅速得到大量转基因奶牛，可采用下列处理方法：在步骤IV中将早期胚胎分割成若干个胚胎。进行上述操作时，应选择发育至__________阶段或桑椹胚阶段的胚胎进行操作，如果选择前者，分割时必须注意要将早期胚胎中的_______均等分割。

（6）将胚胎移入受体牛体内属于__________ 技术，在畜牧生产中采用这种技术的优势主要是_________________________。

(1)获得的8细胞胚胎属于胚胎早期发育的______________期。

(2)用“某种酶”处理获得的胚胎，该酶是________________；“同一溶液”从细胞培养的角度分析，除含有必需的已知营养物质外，还必须添加______________________。

(3)将24细胞胚胎移入一只老鼠子宫内的技术是________，该技术的优势是______________。

(4)若要获得多个组装鼠，可将组装胚培养至_____期进行切割，切割时需注意_____________。