[生物——选修3现代生物技术专题]

   基因疫苗是指编码外源性抗原的基因导入人和动物体内，让其在宿主细胞中表达抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。某科研所计划利用基因疫苗，通过基因工程和胚胎工程技术培育具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛。请回答下列问题：

（1）基因工程的核心步骤是________________________，这一过程需要的酶是___________________________________________。

（2）一个完整的基因表达载体至少包括目的基因，________，________，标记基因等。通常用________________________技术将目的基因导入动物细胞。

（3）欲检测高产奶牛体内是否出现口蹄疫病毒的抗原蛋白，在分子水平上检测的方法及结果是从基因牛中提取________________，用________________________杂交，如果出现杂交带，表明奶牛中出现了抗原蛋白，反之，表明奶牛中未出现抗原蛋白。

（4）胚胎工程最后一道工序是胚胎移植，其实质是_________________________________。

（5）为提高胚胎的利用率，可以采用胚胎分割技术，应该选用___________________分割。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意将____________________均等分割。

牛奶中有机营养物质除蛋白质外还含有乳糖等成分，许多人体内缺乏乳糖酶，无法分解这些乳糖，喝牛奶常会导致腹胀、腹泻、腹痛等症状。科学家已成功培育出了转基因“低乳糖奶牛”。这种奶牛所产牛奶中不含乳糖或含量很低。其生产过程大致如下：

请回答下列问题

（1）在过程 ① 中构建基因表达载体时，需要获取仅在              细胞中特异性表达的基因的启动子，以使乳汁中的乳糖含量降低。构成启动子的基本单位是                 。

（2）将人的肠乳糖酶基因导入奶牛受精卵，常用的方法是                            。

（3）进行过程 ④ 操作前，需要对取自早期胚胎的滋养层细胞利用                   技术进行DNA分析，以鉴定其性别。为提高胚胎的利用率，可将                    期的胚胎进行分割。胚胎中滋养层细胞将发育成                     。

（4）人的肠乳糖酶基因在奶牛中是否成功表达，可以采用抗原—抗体杂交进行检测，其中的抗原是指                             

(1)htPA基因与载体用限制性核酸内切酶切割后，通过DNA连接酶连接，以构建            。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用        技术。

(2)为获取更多的卵(母)细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其        。采集的精子需要经过        ，才具备受精能力。

(3)将重组表达载体导入受精卵常用的方法是        。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的        。

(4)若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到        ，说明目的基因成功表达。

请回答：

（1）过程①注射的A物质是          ，过程④常用的方法是         。

（2）在开展过程⑥时对受体的要求是                                         。

（3）蛋白质水平检测目的基因的表达通常采用的方法是抗原—抗体杂交法，该方法的原理是                            ，采用胚胎分割移植的方法可获得较多基因组成相同的转基因小鼠，分割时可选用桑葚胚期的胚胎，原因是                      。

（4）转基因小鼠因含有一个携带目的基因的DNA片段，故可看作是杂合子。理论上，转基因小鼠相互杂交后代中，有转基因性状的小鼠中纯合子占           。