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            • 1． 逆转录病毒载体是目前应用较多的动物基因工程载体之一．运用逆转录病毒载体可以将外源基因插入到受体细胞染色体，使外源基因随染色体DNA一起复制和表达．研究发现逆转录病毒基因组（RNA）的核心部分包括三个基因：gag基因（编码病毒的核心蛋白）、pol基因（编码逆转录酶）、env基因（编码病毒的表面糖蛋白）．位于这些基因的两端有LTR序列（含有启动子、调节基因等），控制着逆转录基因组核心基因的表达及转移．如图是构建逆转录病毒载体及用于培育转基因小鼠的过程．回答下列问题：
              （1）逆转录病毒的遗传信息储存在    ；过程①原料是    ．
              （2）过程②中，外源基因一定要插入到病毒DNA的LTR序列中的启动子后，其主要目的    ．
              （3）过程③中，导入病毒蛋白编码基因（gag，pol和env）的目的是    ．
              （4）过程④中，逆转录病毒载体感染的细胞一般选择内细胞团细胞，因为这类细胞能    ．此时，早期胚胎处于    期．
              （5）在胚胎移植前，需要对代孕母鼠进行    处理，才能使其生殖器官（子宫）适于早期胚胎的植入和正常发育． 研究中必须对嵌合小鼠进行筛选，只有能产生    的嵌合小鼠才能将获得的新性状遗传给子代．
              难度：中等
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            • 2． 请回答下面有关生物技术的相关问题：
              （1）在进行植物组织培养的过程中，除了提供水分和必要的有机营养物质外，还需要在培养基中加入    和    ．同时，培养过程中，除保证必要的温度、光照和氧气等外界条件外，还必须保证的关键条件是    ．
              （2）应用基因工程、克隆等技术，将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中，利用牛的乳汁生产血清白蛋白的过程中，首先需要构建基因表达载体，做法是将    基因与    的等调控组件重组在一起，再将构建好的基因表达载体导入到    细胞中．
              （3）某养殖户把自己的养鸡场、养猪场、鱼塘和桑园也纳入某一已经构建好的生态园，并把很多单个生产系统通过优化组合有机地整合在一起，改善了系统的功能，这体现了生态工程    原理．
              （4）下列有关生物技术安全性的叙述，正确的是    
              A．一旦发现转基因生物出现了安全性问题，要马上停止实验，并销毁重组生物
              B．人们对转基因食品的担心，从某些实例来看是多余的
              C．转基因生物带来的安全性问题主要包括基因安全、环境安全、生物安全
              D．由于生殖隔离，转基因农作物肯定不会将目的基因传给杂草．
              难度：中等
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            • 3． Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞．下图为科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗的技术流程图，据图回答有关问题：

              （1）步骤①中，在核移植之前应该采集卵母细胞，采用的主要方法是用    处理，使其排出更多的卵子，然后从    中冲取．
              （2）步骤②中，重组细胞培养到囊胚期，可从其    中分离出ES细胞，该细胞在形态上表现为体积小、细胞核大、核仁明显；在功能上具有发育的    ．
              （3）步骤③中，将含有Rag2基因的表达载体导入ES细胞，常采用    法．为检测Rag2基因是否表达出相应的蛋白质，通常采用    的方法．
              （4）转基因和细胞核移植（克隆）等生物技术存在安全性和伦理问题，如科学家赋予转基因生物某些特殊性状，它们有可能成为“入侵的外来物种”，威胁生态系统中其他生物的生存，这属于转基因生物的    （“食品安全”、“生物安全”或“环境安全”）问题；我国政府对待克隆人的态度是    ，不反对治疗性克隆．
              难度：中等
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            • 4． 人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选．利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如下图1所示，请据图作答：

              I．（1）卵母细胞除从活体输卵管中采集外，还可从已处死雌鼠的    中获取．
              （2）图中的高血压相关基因作为    ，质粒作为    ，二者需用     切割后连接成重组载体，该过程与质粒上含有    有关．
              （3）子代大鼠如果    和    ，即可分别在分子水平和个体水平上说明高血压相关基因已成功表达，然后可用其建立高血压转基因动物模型．
              II．图2是某科学家利用小鼠纤维母细胞等获得单克隆抗体的实验研究过程．请据图回答：
              （1）①过程类似于植物组织培养技术中的    过程．②过程的实质是    ．
              （2）③过程中需用到的生物诱导方法是    ．
              （3）④处需要筛选，其目的是    ．
              难度：中等
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            • 5． 内皮素（ET）是一种多肽，它有强烈血管收缩和促进平滑肌细胞增殖等作用，研究发现内皮素功能异常与高血压、糖尿病、癌症等有着密切联内皮素主要通过靶细胞膜上内皮素受体而发挥生物学效应．ETA是内皮素主要受体，科研人员试图通过构建表达载体，实现ETA在细胞中髙效表达，为后期体外研究以及拮抗剂筛选、活性评价等奠定基础．其过程如图（图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因，限制酶ApaI识别序列为C↓CCGGG，限制酶XhoI识别序列为C↓TCGAG）．请分析回答：

              （1）完成过程①、④所需酶分别是    ，过程②相比，过程①特有碱基配对方式是    ．
              （2）过程③中，限制酶Xho I切割DNA，使    键断开，形成的黏性末端是    ，与只使用限制酶
              XhoI相比，用两种限制酶切割获得的优点在于：既能防止    ，还能保证目的基因定向连接到载体上．
              （3）过程⑥中，要用    预先处理大肠杆菌，使其处于容易吸收外界DNA感受态．
              （4）基因工程的核心是图中过程    （填标号），重组质粒中氨苄青霉素抗性基因的作用是    ；利用SNAP与因结合构成融合基因，目的是可以检测    ．
              （5）人皮肤黑色素细胞上有内皮素特异受体，内皮素与黑色素细胞膜上受体后，会刺激黑色素细胞分化、增殖并激活酪氨酸酶活性，从而使黑色素急剧增加，美容时可以注射ETA达到美白祛斑效果，原因是ETA与内皮素结合，    ，抑制了黑色素细胞的增殖和黑色素的形成．
              难度：中等
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            • 6． 研究者根据果蝇X染色体上红眼基因B设计出sgRNA，导入果蝇早期胚胎细胞，“敲除”部分胚胎细胞中的红眼基因B，得到镶嵌体果蝇（即复眼中部分小眼呈红色，部分小眼呈白色），如下表．
              sgRNA 浓度（ng/mL）不注射01252505001000
              胚胎存活率（%）16118673
              镶嵌体果蝇比例（%）0010175086
              （1）从实验结果分析，sgRNA的导入    了果蝇胚胎的存活率，若要从相同数量的早期胚胎中获得数量最多的镶嵌体果蝇，应选用的sgRNA浓度为    ng/mL．
              （2）如图所示，敲除基因时，sgRNA与红眼基因B的部分序列互补配对，细胞内的Cas9酶在配对区域定点剪切，引起红眼基因B发生碱基对    ，导致基因突变．该过程中，sgRNA和Cas9酶共同剪切DNA的作用类似于    酶的作用，敲除后需要    酶对DNA上的切口进行修复．

              （3）若研究者要通过测交实验验证镶嵌体雄果蝇的基因组成，应将镶嵌体雄果蝇与表现型为    的果蝇进行杂交，预期杂交后代的表现型是    ．
              （4）这种定点敲除基因的方法为艾滋病的治疗提供了一个思路．HIV通过识别膜蛋白C侵入宿主细胞，研究者可以根据    的核苷酸序列设计sgRNA，导人骨髓    细胞中，有效阻止HIV侵染新分化生成的T淋巴细胞．
              难度：中等
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            • 7． 下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结 构或细胞．请据图作答：

              （1）在构建基因表达载体时，应使用    限制酶切割目的基因和质粒，再用    酶使它们连接起来．重组质粒除包括目的基因、标志基因、复制原点外，还应该有    、    ．
              （2）限制性核酸内切酶的作用是    ，作用的化学键是    ．
              （3）研究人员通常采用    法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内．在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质，通常采用    方法．
              （4）利用    技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培养成新个体，该过程利用的原理是    ，该培养过程的培养基还要添加的植物激素有生长素和    ．
              难度：中等
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            • 8． 如图是体外受精技术培育试管动物的大致流程，请回答下列问题：

              （1）精子的顶体内含有    能协助精子穿过卵母细胞的    ．
              （2）体外培养受精卵时，除给予一定量的O2以维持细胞呼吸外，还提供    气体以维持    相对稳定．
              （3）动物的早期胚胎需移植到同种且    与供体相同的动物体内，被移植的胚胎之所以能存活是因为受体对    ．
              （4）如果将某种目的基因导入动物细胞，以期获得新性状，最常用的方法是用显微注射技术将    导入受精卵中，目的基因能够导入到受体细胞内，并且在受体细胞中稳定表达的过程称为    ．
              难度：中等
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            • 9． 如图是我国利用基因工程方法生产人生长激素的示意图．图中的质粒是基因工程中常选用的载体--pBR322质粒，ampR表示青霉素抗性基因，tetR表示四环素抗性基因，限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同．据图回答下列问题：

              （1）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，③过程采用的酶是    ，④过程采用的酶是    ．
              （2）为了提高⑤过程的成功率，常用    溶液处理大肠杆菌．作为受体的大肠杆菌细胞内，应不含    基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌．
              （3）如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ同时对质粒进行切割，假设同时只有任意两个位点被切断且每次机会相等，则形成的DNA片段有    _种，其中含有完整四环素抗性基因的DNA片段占_    _．
              （4）按照图示的操作，将三角瓶中的大肠杆菌先接种到甲培养基上，然后分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置，一段时间后，菌落的生长状况如图所示．接种到甲培养基上的目的是筛选    的大肠杆菌．
              （5）能否利用人的皮肤细胞来完成①过程    ，原因是    ．
              难度：中等
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            • 10． 羊绒是生长在山羊外表皮层的绒毛，属于稀有的特种动物纤维．绒山羊的毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIFⅡ）基因与其所产的羊绒质量密切相关．用生物工程技术能获得转KIFII基因的高绒质绒山羊，其简单流程如图所示．请回答有关问题：

              （1）在基因表达载体构建过程中，其组成除KIFⅡ基因外，还必须有标记基因．标记基因的作用是    ．过程②中常用    的方法将目的基因导人受精卵．
              （2）过程⑥中，除了给予一定量的O2维持细胞呼吸外，还需要提供CO2气体以维持培养液的    ．
              （3）过程⑦中胚胎在受体内存活的生理基础是受体对移人子宫的外来胚胎不发生    反应．为使代孕母羊与供体母羊生殖器官的生理状态相同，需用相关激素对代孕母羊作    处理，进行过程⑦的最佳时期是    ．
              （4）若要同时获得多只与此转基因母羊相同的羊，可对早期胚胎进行    ，操作若选用囊胚期的胚胎，操作过程中要特别注意    ．
              难度：中等
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