有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示.

（2）纯化菌株时，通常使用的划线工具是___________。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有________________________________________。

（3）为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。该实验的假设是_________________________，该实验设计是否合理？为什么？_________________________________________________________________。

(1)图甲是利用__________法进行微生物接种，图乙是利用________法进行微生物接种。这两种方法所用的接种工具分别是______和_________；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是________和酒精消毒。

(2)接种操作为什么一定要在火焰附近进行？___________________。

(3)接种后，在固体培养基上培养细菌时为什么进行倒置培养？__________________。

葡萄种植基地为解决葡萄滞销易腐烂问题，引进果酒、果醋生产线进行葡萄的深加工，获得了较好效益，其菌种筛选和生产流程如图所示。其中在纯化菌种A时，共接种了甲、乙、丙、丁、戊五个平板，每个平板接种量均为O.lmL。纯化菌种B釆用的是划线接种。请回答下列问题：

（1）候选菌种A和B在细胞结构上的最大差别是菌种A有              。图中筛选菌种所用的培养基在灭菌时温度为                。

（2）纯化菌种A时，乙平板的菌落分布如上图所示，则纯化菌种A的接种方法为                    ，接种乙平板时的操作失误是                  。

（3）纯化菌种A的过程中，除乙平板外，其余的甲、丙、丁、戊平板的菌落数分别是180、 200、420、190，则样品中菌种A的密度为       个/mL，此方法计数的结果常常低于实际值，原因是                           。

（4）果醋发酵与果酒发酵相比，提供的不同条件有                          。

已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题：

(1)显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用________染色。微生物A产生的油脂不易挥发，可选用__________(填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”)从菌体中提取。

(2)为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以________为碳源的固体培养基进行培养，培养基灭菌采用的最适方法是____________   法。

(3)若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用________________直接计数；若要测定其活菌数量，可选用______________法进行计数。

(4)为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35℃、40℃、45℃温度下降解10 g油脂所需酶量依次为4 mg、1 mg、6 mg，则上述三个温度中，______ ℃条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕________ ℃设计后续实验。

豆浆是深受中国百姓喜爱的饮品，但易变质，保质期较短。科研人员对变质豆浆中的腐败细菌进行分离，并研究了乳酸链球菌素对腐败细菌的抑制效果，为生产豆浆时，优化保质方法提供依据。主要研究过程如下：

①豆浆变质处理 将2种市售豆浆A、B和自制豆浆在无菌操作台上分别装入已灭菌的250mL三角瓶中，密封、37℃条件下，放置7d后，豆浆发生变质。

②腐败细菌的初步分离和计数 取变质的豆浆在无菌条件下接种到细菌培养基上，培养一段时间后，统计各培养基上菌落种类和数量。结果如下表：

③比较乳酸链球菌素添加量对腐败细菌的抑制效果 以自制的新鲜豆浆为材料，经相应处理后，在37℃下放置35d后，统计豆浆中腐败细菌数量，结果如图。

请回答下列问题：

（1）步骤①中三角瓶的常用灭菌方法是         ，步骤②中培养基的常用灭菌方法是                。

（2）步骤②中适宜采用的接种方法是              。区分菌落种类的依据是                  。统计菌落种类和数量时要每隔24h观察统计一次，直到各类菌落数目稳定，以防止              。

（3）乳酸链球菌素是一种天然食品防腐剂，它是由34个氨基酸组成的多肽。步骤③结果表明，最能耐受乳酸链球菌素的细菌是         ；为有效防止豆浆腐败，在生产中乳酸链球菌素的添加量应控制在              左右。

（4）与用抗生素防腐相比，使用乳酸链球菌素防腐的优点是                。

2017年7月郑州市卫生计生委发布的第3期卫生监测信息显示有15家美容美发场所的毛巾、理发(美容)用具大肠杆菌严重超标。如图甲为大肠杆菌含量检测操作简图，图乙为伊红美蓝培养基配方。

回答下列相关问题：

(1)图甲中滤膜的孔径应________(“大于”或“小于”)大肠杆菌。受此启发，对某些不耐高温的试剂可以怎样除菌？____________________。

(2)配制图乙中的基础培养基时，除了水分、无机盐以外，还应加入________(一种营养成分)，以及____________。待各成分都溶化后和分装前，要进行的是____________，对培养基进行灭菌的常用器具是________________。倒平板时要待平板冷凝后，将平板倒置，其主要原因是________________________________。伊红美蓝培养基上生长的大肠杆菌菌落呈现黑色，从功能上划分，该培养基属于________培养基。

(3)用平板划线法分离样液中的大肠杆菌，操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线的目的是_______________ _______。要检测样液中的大肠杆菌含量，取25 cm²毛巾样本，加5 mL蒸馏水，浸润半小时，然后在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL样液；在37 ℃的培养箱中放置48小时，3个平板上的黑色菌落数分别为49、48和47。据此可得出25 cm²毛巾样液中的活菌数为________。

下表是培养某微生物的培养基的配方，请回答下列问题：

(1)培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、碳源、________和无机盐。上述培养基配方中能充当碳源的成分是____________________。培养基配制完成以后，一般还要调节pH并对培养基进行________处理。

(2)在配制培养基时，除考虑营养条件外，还要考虑________、____________和渗透压等条件。

(3)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行________(填“消毒”或“灭菌”)；操作者的双手需进行清洗和________；空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质________，还能损伤DNA的结构。

(4)分离纯化微生物最常使用的接种方法是__________和________________。

乙醇等“绿色能源”的开发备受世界关注。利用玉米秸杆生产燃料酒精的大致流程为：

 (1)玉米秸杆经预处理后，应该选用_________酶进行水解，使之转化为发酵所需的葡萄糖。这种酶由_____酶、_____酶和__________酶组成。

 (2)从以下哪些微生物中可以提取上述预处理所需的酶 （    ）

A.酿制果醋的醋酸菌   B.生长在腐木上的霉菌 

C.制作酸奶的乳酸菌   D.生产味精的谷氨酸棒状杆菌    

(3)若从土壤中分离产生这种酶的微生物，培养基中的碳源为___________。 

(4)发酵阶段需要的菌种是__________，在产生酒精时要控制的必要条件是_________、________。发酵产生酒精的反应式为_____________________。    

苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如下图所示，①为土壤样品。请回答下列问题。

(1)②中培养目的菌株的选择培养基中应加入________作为碳源，②中不同浓度碳源的培养基________(A.影响;B.不影响)细菌的数量，如果要测定②中活细菌数量，常采用________法。

(2)④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤培养基的主要区别在于________;使用________法可以在⑥上获得单菌落。

(3)采用固体平板培养细菌时为什么进行倒置培养? ______________________。

(4)实验过程中如何防止其他微生物的污染?__________________________。

分析有关资料，回答问题。

I.下表是某培养基的配方。

（1）将幽门螺杆菌接种到pH适宜的该培养基中，最常用的接种方法有__________和稀释涂布平板法。然后置于37℃下培养一段时间后，在该培养基中幽门螺杆菌的数目比刚接种时少，主要原因是____________________________。

（2）纯化细菌时使用的培养基一般用_____________法灭菌，_________________（填“可”或“不可”）用加入抗生素的方法防止杂菌感染。

（3）某小组采用平板划线法分离该细菌。在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是____________________________________________。

II.下列是提取胡萝卜素的操作，请回答有关的问题：

（4）工业生产上，用养殖的岩藻作为原料提取胡萝卜素时，_____________（填“需要”或“不需要”）将新鲜的岩藻干燥。

（5）现有乙醇和乙酸乙脂两种溶剂，应选用其中的________作为胡萝卜素的萃取剂，不选用另外一种的理由是____________________________________________。

Ⅲ.   下图表示利用小鼠胚胎干细胞(ES细胞)做的两项研究，请分析回答下列问题。

(2)a过程构建基因表达载体所使用的工具酶有______________________________，将基因表达载体导入ES细胞的方法是______________。

(3)完成c、d过程的胚胎工程技术分别是________________、_________________。

(4)正常情况下癌细胞的产生是__________导致的；用特定癌细胞的抗原刺激B淋巴细胞，再与骨髓瘤细胞融合后获得________________，与抗癌药物结合制成“生物导弹”，从而定向杀死小鼠癌症模型体内的癌细胞。