常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，科学家欲从果园的葡萄上或土壤中分离这种酵母菌。操作如下：

(1)制备酵母菌培养基要进行倒平板操作，待平板冷凝后，要将平板倒置，其主要原因是______________________________________。获得纯净培养物的关键是____________________。

(2)纯化菌株时，通常使用的划线工具是________。在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是__________________________。划线的某个平板经培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误是______________________________。

(3)将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后将瓶中的液体用涂布器涂布接种于以木糖为唯一________的固体培养基上，在适宜的条件下培养一段时间，获得能利用木糖的多个酵母菌__________。实验中所用培养基按功能属于__________培养基。

(4)若要检测土样中的酵母菌含量，应采用__________________法。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，这样做的目的是______________________________。然后，将1 mL土壤溶液分别稀释10倍和100倍，各在3个平板上分别接入每种稀释度的稀释液0.1 mL，经适当培养后，6个平板上的菌落个数分别为59、57、58、2、7和5，据此可得出每升土壤溶液中的活菌数为____________个。

常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，科学家欲从果园的葡萄上或土壤中分离这种酵母菌，操作如下：

(1)获得酵母菌纯净培养物的关键是____________________。

(2)在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是__________________________。 划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落，造成划线无菌落可能的操作失误是________________________________。

(3)将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后将瓶中的液体用涂布器涂布接种于以木糖为唯一________的固体培养基上，在适宜的条件下培养一段时间，获得能利用木糖的多个酵母菌菌落。

(4)若要检测土样中的酵母菌含量，应采用____________法。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，这样做的目的是________________________________________。

工业生产中，提取天然β—胡萝卜素的方法之一：利用红酵母等微生物进行发酵，经过菌体裂解、离心后进行萃取。回答以下有关问题：

(1)若要初步确定某一菌株是否为红酵母菌株，相对简便的操作是通过_________法将菌种接种于固体培养基上，并在适宜的条件下培养一段时间，观察其形成的菌落的_____________(填2个)特征。

(2)碳源的种类对β胡萝卜素的产量有着一定的影响，有关研究结果如下：

据表分析，最佳碳源是_________。若要进一步探究最佳氮源，请简要写出实验设计思路：____________________________________________________。

(3)有科研人员尝试利用紫外线处理红酵母，以获得高产菌株。对处理所得菌株分别进行培养并经裂解、离心后，根据β—胡萝卜素_____________________的特点，可以采用有机溶剂萃取法萃取产物，并对萃取产物通过_______________法进行鉴定，鉴定过程需要用_____________样品进行对比。经定量分析后，若得到高产菌株，要对其进行长期保存，可采用__________的方法在—20℃的冷冻箱中保存。

苹果干腐病是一种名为茶藤子葡萄座腔菌的真菌引起的疾病，病菌通常由枝条伤口入侵感染，在伤口处形成溃疡。某中学的科研小组计划分离出该真菌，并进行药物防治实验，为苹果干腐病的防治提供合理的建议。经过查阅资料，确定了分离时所用的PDA培养基配方，如下表所示：

    该真菌在上述PDA培养基上生长时有特定的形态特征：辐射状白色匍匐菌丝，绒毛状。

    (1)要获得菌落，则上表中还应添加的成分是________。氯霉素的作用是______________。培养基的制备步骤包括计算、称量、溶化、________、倒平板。等平板冷却凝固后，将平板______________，以防止冷凝水污染培养基。

    (2)用剪刀从染病枝条溃疡处剪取1×1 cm²的患病组织，并用0.1％的升汞进行消毒，置于培养基中心，在合适条件下进行培养，共培养五组。待菌落形态特征稳定后，用______________法将该致病菌分别转移至含有等量0.5％苦水碱剂、40％福美砷、清水的上述PDA培养基中进行抗药性实验，并每隔24 h记录一次最后划线区域的菌落数目。

    ①选取______________的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而导致的菌落数目遗漏。

    ②记录结果如下：

    从结果分析可知，_______________能很好地抑制该真菌的生长，适合用于防治苹果干腐病。

常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，但是对酒精的耐受能力差。科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母。

（1）将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后将瓶中的液体用________法接种于固体培养基上，在适宜的条件下培养，获得各种菌落。

（2）将培养基上的酵母菌菌株转接到________的培养基中，无氧条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌不能利用木糖发酵。从存活的酵母菌中提取DNA，经大量扩增获得目的基因。

（3）将目的基因连接到质粒上，该质粒具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因。将重组质粒导入酵母菌时，应选择缺乏________能力的酿酒酵母作为受体菌。

（4）将上述获得的转基因酿酒酵母接种在以_________和_________为碳源的培养基中进行发酵能力测试。随着发酵的持续进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能_________，即说明所需菌株培育成功。

乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖,具有重要应用价值。乳糖酶的制备及固定化步骤如下:

产乳糖酶微生物L的筛选 产乳糖酶微生物L的培养 乳糖酶的提取纯化 乳糖酶的固定化

(1)筛选产乳糖酶的微生物L时,宜用          作为培养基中的唯一碳源。培养基中琼脂的作用是            。从功能上讲,这种培养基属于              。 

(2)培养微生物L前,宜采用            方法对接种环进行灭菌。 

(3)纯化后的乳糖酶可用电泳法检测其分子量大小。在相同条件下,带电荷相同的蛋白质电泳速度越快,说明其分子量越              。 

(4)乳糖酶宜采用化学结合法(共价键结合法)进行固定化,可通过检测固定化乳糖酶的            确定其应用价值。除化学结合法外,酶的固定化方法还包括              、               、离子吸附法及交联法等。

【生物一选修1:生物技术实践】

胡萝卜素广泛用于食品、饲料、化妆品、医药等工业，目前主要通过化学合成、植物提取及微生物发酵生产，回答下列问题：

（1）根据胡萝卜化学性质稳定，不溶于水，易容于有机溶剂的特点，可以采用          法提取。为保证提取效果，材料提取前要进行             处理，可以选用             （填“乙醇”或“石油醚”）作为提取剂。

（2）①现从红色淤泥中筛选出一种生产胡萝卜素的红酵母菌株，纯化并可计数的接种方法为           。要大量繁殖该菌株成选用        培养基（填“液体”或“固体”）。在研究初期，要频繁使用该菌种，应对其采用           法进行短暂保存。

②如果意外获得一种能利用纤维素的红酵母菌株，某同学在对其纯化的过程中，为避免杂菌污染，要对培养基进行            灭菌，检验培养基是否污染的方法是                                                                          。

(1)在样品稀释和涂布平板步骤中,下列选项不需要的是　　　　(填序号)。

①酒精灯　②培养皿　③显微镜　④无菌水

(2)在涂布平板时,滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。

(3)向试管内分装含琼脂的培养基时,若试管口粘附有培养基,需要用酒精棉球擦净的原因是　　　　　　　　　　。 

(4)刚果红可以与纤维素形成红色复合物,但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。研究人员在刚果红培养基平板上,筛到了几株有透明降解圈的菌落(见图)。图中降解圈大小与纤维素酶的　　　　　　有关。图中降解纤维素能力最强的菌株是　　　　(填图中序号)。 

(5)研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株J1和J4,在不同温度和pH条件下进行发酵,测得发酵液中酶活性的结果见下图,推测菌株　　　　更适合用于人工瘤胃发酵,理由是　 　　　　　　　　　　　　　　　　　。 

某兴趣小组进行研究性学习，探究“影响细菌生长繁殖的因素”。在培养细菌的过程中，发现了某种细菌(记做R)的周围其他细菌的生长繁殖受到抑制。把R细菌接种到专门的培养基上进行培养，一段时间后，除去R细菌，用该培养基再培养其他细菌，结果其他细菌仍然不能在这个培养基上生长和繁殖。

   (1)从生态学的角度分析，R细菌与周围细菌之间的关系是          。

   (2)于是，某同学假设了“造成R细菌的周围其他细菌不能生长和繁殖”的可能原因，你认为最可能的是          。

   A．R细菌占据了其他细菌的生存空间            B．R细菌吞噬了其他细菌

   C．R细菌产生了不利于其他细菌生存的物质   D．R细菌更容易吸收培养基中的物质

   (3)参照上述题目中给出的有关材料，请你设计一个实验对第(2)题所作的选择进行验证，简述你的实验步骤及结论：

   ①方法步骤

   第一步：取两个培养皿，按相同营养成分配制甲、乙两个培养基。

   第二步：                                                                           。

   第三步：两个培养基分别接种相同的其他细菌。

   第四步：                                                                           。

   ②结果：                                                                           

                                                                                      。

   ③结论：                                                                           

                                                                                      。

为了获得纯度高的大肠杆菌,需要对大肠杆菌进行培养和分离。培养大肠杆菌一般用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。

(1)培养大肠杆菌,配制固体培养基的基本步骤:计算→称量→________→_________→倒平板。 

(2)称量时,由于牛肉膏比较黏稠,可以用______挑取,放在____上称量。由于牛肉膏和蛋白胨______,称量时动作要迅速,称量后要及时盖上瓶盖。 

(3)在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上的大肠杆菌能生长,说明培养基含有_________等大肠杆菌生长所需的营养要素。 

(4)微生物纯化培养可以通过多种接种方法_________和_________等,使大肠杆菌在固体培养基上形成单个_________,从而获得纯菌株