有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：

(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以________为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于________培养基。

(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即________________和______________。接种时所用的接种环通过________灭菌，在第二次及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线，该分离纯化方法称________法。

(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力________。

(4)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、____________和____________________。无菌技术要求实验操作应在酒精灯________附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。

（2）若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可采用的接种方法是 _________ ．对分离的细菌数目统计时，统计的菌落数目往往比活菌的实际数目偏少，原因是_________________________ 。

（3）在实验室应采用___________法对培养基进行灭菌处理，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在_____________条件下进行．若发现在⑤中菌落过多，无法准确计数，可以将③中取出的菌液_____________________________ ．

Ｉ下图表示单克隆抗体制备过程示意图。据图回答：

（1）淋巴细胞是由动物体骨髓中的造血干细胞分化、发育而来得到，B淋巴细胞从小白鼠体内分离之前,应对小白鼠进行的处理是_________________ ,该处理的实质是在小白鼠体内发生_____________过程。骨髓瘤细胞与进行原代培养的细胞相比较,遗传物质发生的主要变化是___________,从而违背了“程序性细胞死亡”规则,打破了细胞产生与细胞死亡的动态平衡。

（2）____________________技术是单克隆抗体技术的基础，根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于__________培养基，试设想运用生物工程其它领域的技术制备单克隆抗体的另一条途径________________ 。

（3）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的_______________特点，又具备B淋巴胞的_______特点。单克隆抗体与常规的血清抗体相比 ，最大的优越性是_______________，_______________。                                            

II绿色荧光蛋白(GFP)能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，GFP基因可作为目的基因用于培育绿色荧光小鼠，下图表示培育绿色荧光小鼠的基本流程：

（1）①过程需要限制酶切断________________键，使DNA分子断裂，其结果形成_____________。图中过程②常用的方法是_____________ ；过程③利用的生物技术主要是___________________；在进行过程④前，利用______________技术可以获得数目更多且基因型相同的绿色荧光小鼠。

（2）GFP基因与目的基因一起构建到载体上不影响目的基因的表达，也不影响由目的基因控制合成的蛋白质的结构与功能,且对细胞无毒性作用，因此GFP基因可以作为基因表达载体上_____________。

（3）获取外源基因若需在短时间内获得大量的某种外源基因，通常采用 _________ 技术．在供体雌鼠发情周期的某一阶段，用______激素处理促使卵巢里大量卵泡成熟并排出，称为超数排卵．在让供体母鼠与健康公鼠交配的同时，让代孕母鼠与结扎公鼠进行交配，使代孕母鼠与供体母鼠的生理条件达到同步或者一致，称为 __________ 处理．将目的基因导入受体细胞后，还需对转基因生物进行_________________。

氟乐灵（C₁₃H₁₆F₃N₃0₄）是播种前封杀棉田中一年生杂草的主要农药之一。氟乐灵残留大多聚集在土壤深度10～20cm，容易造成表层土壤的持续污染。为降低土壤中氟乐灵的残留，某科研团队从连作15年的棉田分离出了对氟乐灵有良好降解作用的菌株D8，并对其降解特性进行了一系列的研究。图1～3是部分研究成果，图中数据均为接种72h后测得，OD₆₀₀表示菌种在波长600nm处的吸光值，代表菌密度。请回答下列问题：

（1）土壤取样时，一般采集深度选择在10～20cm，原因是      。

（2）为分离出氟乐灵降解菌，研究人员配制了选择培养基，该培养基应以氟乐灵为唯一的     以达到分离目的。

（3）对氟乐灵降解菌D8进行分离和计数常用稀释涂布平板法，此方法测得的菌落数往往比活菌的实际数目偏      ，原因是     。

（4）分析图1可知，接种量对菌密度和降解率影响分别是     。

（5）据图2分析，在氟乐灵质量浓度较高的情况下，降解率反而较低，原因是      。

（6）图3研究过程中，为了排除PH对氟乐灵降解的影响，需设置对照，对照组的处理方式是    ，结合图1、2、3分析，菌株D8对氟乐灵进行降解的最佳条件组合是    。

回答下列微生物及其培养问题

　　农业上广泛使用的除草剂在土壤中不易被分解，长期使用会污染土壤。为了修复被污染的土壤，可按下图程序选育出能降解该除草剂的细菌。（注：已知该除草剂是一种含氮有机物；含一定量该除草剂的培养基不透明。）

（1）微生物培养过程中需要的营养物质主要有_________________。由于不同种类微生物的菌落特征表现不同，因此可以利用__________（填“固体”或“液体”）培养基来培养，通过观察菌落特征对微生物进行初步的鉴定和分类。

（2）培养基的配制主要包括如下步骤：①溶化，②调pH，③高温高压灭菌，④称量。这些步骤正确的顺序是__________。（填编号）

（3）实验中进行平板划线操作（如图乙、丙所示）的目的是__________。在具体操作时，首先要将接种环通过（填编号）__________（①紫外线；②酒精灯灼烧；③高压蒸汽）灭菌；第二次及以后的划线，总是从__________开始。

（4）为了选育出能降解除草剂的细菌，在配制培养基时需添加一定量的该除草剂，其原因是____________________。

（5）为防止冷凝水影响细菌的生长，需将培养皿__________培养。在培养基上产生的单个菌落在生态学中可以被称为__________。

（6）如果筛选能降解该除草剂的细菌结果如图丁所示（A~E分别表示不同的菌株），其中的B、D菌株周围无透明圈形成，说明____________________；如果从A~E菌株中选育高效的能降解该型除草剂的细菌，应选育菌株__________。

（7）为探究此除草剂的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图戊所示实验。该实验的假设是目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质；该实验设计缺少对照处理，正确的对照处理是__________________。

纤维素分子不能进入酵母细胞．为了使酵母菌能够利用环境中的纤维素为原料生产酒精，构建了含3种不同基因片段的重组质粒，下面是酵母菌转化及纤维素酶在工程菌内合成与运输的示意图．

A．①②

B．①③

C．②④

D．③④

（3）纤维素酶基因的表达包括__________和___________过程，与菌株Ⅱ相比，在菌株Ⅲ、Ⅳ中参与纤维素酶合成和分泌的细胞器还有__________

（4）在以纤维素为唯一C源的培养基上分别培养菌株Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，菌株__________不能存活，原因是____________________________．

（5）酵母菌生产酒精的细胞部位是_______________,产生酒精时细胞的呼吸方式是________________．在利用纤维素生产酒精时,菌株Ⅳ更具有优势，因为导入的中重组质粒含有_________，使分泌的纤维素酶固定于细胞壁，减少因培养液更新而造成的酶的流失，提高酶的利用率．

葡萄种植基地为解决葡萄滞销易腐烂问题，引进果酒、果醋生产线进行葡萄的深加工，获得了较好效益，其菌种筛选和生产流程如图所示。其中在纯化菌种A时，共接种了甲、乙、丙、丁、戊五个平板，每个平板接种量均为O.lmL。纯化菌种B釆用的是划线接种。请回答下列问题：

（1）候选菌种A和B在细胞结构上的最大差别是菌种A有              。图中筛选菌种所用的培养基在灭菌时温度为                。

（2）纯化菌种A时，乙平板的菌落分布如上图所示，则纯化菌种A的接种方法为                    ，接种乙平板时的操作失误是                  。

（3）纯化菌种A的过程中，除乙平板外，其余的甲、丙、丁、戊平板的菌落数分别是180、 200、420、190，则样品中菌种A的密度为       个/mL，此方法计数的结果常常低于实际值，原因是                           。

（4）果醋发酵与果酒发酵相比，提供的不同条件有                          。

植物组织培养技术被广泛应用于培育无病毒植株、育种及获得植物次生代谢产物等生产生活实际。如图为番茄植株的培育过程。分析回答下列问题：

(1)①过程中使用了____________酶，获得植物细胞原生质体，此处使用的溶液浓度不宜过小，以防止细胞原生质体________。

(2)铺平板类似于微生物接种，该过程必须在________旁进行操作。平板中添加蔗糖的目的除了提供营养外，还有________的作用。

(3)同一番茄植株不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因________(填"相同""不相同"或"不一定相同")；图中属于再分化的过程是________(填序号)。

(4)多倍体番茄植株所结果实中维生素含量更高，若想培育多倍体番茄，可选择在图中的过程③中添加____________进行处理，也可以选择在过程⑥中添加__________进行处理。

根据植物有效成分的提取等相关知识回答下列问题

Ⅰ：胡萝卜素是一种常用的食用色素，可分别从胡萝卜或产胡萝卜素的微生物菌体中提取获得，流程如下：

（1）筛选产胡萝卜素的酵母菌R时，可选用___________或平板划线法接种。所用培养基从功能上分属于____________。

（2）培养酵母菌R时，在提供四种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物对Ph、________________以及氧气的要求

（3）从胡萝卜中提取胡萝卜素时，干燥过程应控制好____________以防止胡萝卜素分解；萃取过程中宜采用 _________方式加热以防止温度过高；萃取液浓缩前需进行过滤，其目的是____________

（4）纸层析法可用于鉴定所提取的胡萝卜素，鉴定过程中需用胡萝卜素标准品作为       。

Ⅱ：植物芳香油提取的最常用方法是___________ ，向收集到的乳浊液中中加入氯化钠有利于________，分离的油层中还需加入__________吸水

牛奶富含矿物质和满足人体生长发育所需的全部氨基酸，消化率高达98％。长期饮用牛奶有利于增强体质，但牛奶也是多种病菌的传播载体。下图是牛奶消毒及细菌检测实验的过程图。请回答下列相关问题：

（1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的基本步骤是___________________________________，

（2）培养基中的蛋白胨为细菌的生长提供的营养物质主要有________（填两个），对培养基常采用________法进行灭菌。

（3）步骤①称为________消毒法，步骤②是________。

（4）步骤③纯化细菌的接种方法是________。除此方法外还有一种纯化的方法是______________，微生物培养过程中，为防止冷凝水影响细菌的生长，需将培养皿________培养。

（5）将接种后的培养基放入________中培养，36h后取出，统计3个平板上的菌落数分别是87、83和85。经过消毒后的牛奶中，细菌数大约是________个／mL。

研究发现柚皮精油和乳酸菌素(小分子蛋白质)均有抑菌作用，两者的提取及应用如下图所示。

（1）柚皮易焦糊，宜采用________法提取柚皮精油，新鲜的柚皮干燥去水，并用________浸泡处理。

（2）培养基中的尿素和牛肉膏可为乳酸菌A生长提供________________________。

（3）做抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。可通过测定透明圈的________来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。

(4)柚皮油也可以用萃取法来提取，原因是________________________。从下图分析，提高萃取效果的方法是__________________________、__________________________。