已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但有些淋巴细胞不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖。将这两种细胞在培养皿中混合，加促融剂促进细胞融合，获得杂种细胞，并生产单克隆抗体。请回答：

（1）生产单克隆抗体时，不直接利用浆细胞，主要原因是_______________ 。

（2）①过程中，常用的与植物细胞融合相同的诱导剂是_____________________。

（3）②过程为_______培养，培养液中还需通入气体物质，其中通入CO₂的目的是__________。

（4）④表示杂交瘤细胞的扩大培养,其既可在体外培养，也可注射到小鼠_______内培养.体内培养与体外培养相比,其优点是_____________________。

（5）为了从培养液中分离出杂交瘤细胞，需在③过程向培养液中加入________________，理由是杂交瘤细胞可利用____________________途径合成DNA，从而才能在该培养液中增殖。

(1) 植物体细胞杂交的第①步是去掉细胞壁，分离出有活力的原生质体。目前此步骤最常用的方法是酶解法，也就是在温和的条件下用 _____________________等分解植物的细胞壁。

(2) 人工诱导②过程原生质体融合的化学方法是用 ______________等试剂作为诱导剂。动物细胞融合还常用到 ________________作为诱导剂。

(3) ③表示融合后的原生质体再生细胞壁，新细胞壁的产生与细胞内 ________(细胞器)有密切关系。

(4) 图中④过程表示 ______________，⑤过程表示 ______________ 。

下图为细胞融合的简略过程示意图，请据图完成问题：

（1）若A、B是植物细胞，在细胞融合之前已用酶处理去掉了细胞壁，所用的酶可能是_________，由此生成的Ａ和Ｂ称为_________；A、B到细胞C的过程中，常用的物理方法有离心、振动、电激。融合完成的标志是________。

（２）若A、B是动物细胞，一般取自幼龄动物的器官、组织，然后用________使其分散开来；A、B到C的过程中，常用的不用于植物细胞工程的方法是用______________诱导细胞融合。对融合得到的D进行大规模培养时需要提供的气体环境为______________，其中CO₂的作用是__________________。此外，培养液还应进行无菌处理，通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防                           。

自然界中有一种含有叶绿体的原生动物一一眼虫，这说明植物的细胞器同样可以在某些动物细胞中存活。某同学提出问题： “动物细胞与植物细胞之间可以实现杂交吗？”他尝试设计出如图所示的实验方案。结合实验方案回答问题：

实验原理：根据眼虫的特点，动物细胞和植物细胞之间在理论上是可以实现杂交的。

实验步骤如下：

（1）①中选的植物材料细胞中，必须有的细胞器是________。

（2）③过程所用的酶是________。

（3）④过程除了用电激之外，还可以用________等作为诱导因素。（答出两种）

（4）⑤过程中动物细胞体外培养需要满足的条件是________、________、________。

（5）在整个实验过程中，要强调所用的器械的灭菌和无菌操作，原因是各种杂菌可以在培养基上迅速生长，培养基一旦被污染，迅速生长的各种杂菌不但会和________争夺营养，而且这些杂菌生长的过程中会产生大量________导致培养物迅速死亡。

（6）在⑤⑥过程中，通常要添加血清，原因是________________。

胡萝卜是生活中常见的植物，根据所学知识回答下列有关问题。

（1）胡萝卜的韧皮部细胞中含有核酸的细胞器有&;      ，胡萝卜植株叶肉细胞的叶绿体和线粒体中，部分蛋白质由细胞核基因指导合成，说明二者具有       （选填“自主”、“半自主”）细胞器的特点。

（2）从胡萝卜中提取胡萝卜素常用的方法是        法，用这种方法提取胡萝卜素常选用石油醚作为溶剂。

（3）一般情况下，提取胡萝卜素时，提取效率与原料颗粒的含水量成       比。

（4）对提取的胡萝卜素粗品进行鉴定时需要用         对照。

（5）用胡萝卜韧皮部进行植物组织培养所用的MS培养基通常要加入一定量的       、        等植物激素，以启动外植体的细胞分裂、脱分化和再分化。这两种激素的使用先后顺序和     都会影响植物组织培养的结果。

40 【生物———选修 3 :现代生物科技专题】( 15 分)

下图是人体免疫物质的培养方法，①~⑥ 表示不同的过程，请回答。

（1）方法 1 中，细胞 A 应具备的特点是      。体外培养细胞 Y 需要满足以下条件：           、添加了血浆（或 “血清”）培养基、适宜温度与pH、         的气体环境等。

（2）方法 2 中，通过④得到的目的基因与细胞 B 中原有基因            （一定/不一定）相同，⑤过程必须用到的工具酶有           ，结构甲的组成必须包括          及目的基因等。

（3）若用棉花生产抗体 2，⑥过程的受体细胞应选用                   ，经过一系列的过程得到再生植株。要确认该抗体基因是否在再生植株中正确表达，通常采用                  法，在田间试验中检测植株是否含有该种抗体。

（1）利用乳腺反应器生产抗体

将黑色素瘤抗体基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，构建            ，通过                 方法导人山羊受精卵中，在体外培养到           时期，进行胚胎移植，获得转基因山羊，待其成熟后，从乳汁中提取抗体。

（2）利用杂交瘤细胞生产抗体

 ①下列是该技术的部分图解，请把代表各步骤的字母填写在流程示意图中。

②该方法生产的黑色素瘤单克隆抗体的优点是                             。

(1)若A、B细胞为动物细胞，A、B融合为C的过程说明了细胞膜具有________。若A、B到C的过程是体外受精过程，则精子必须进行________处理，卵子必须发育到________期，用________处理，可以获得较多的卵子。

(2)若A、B细胞为植物细胞，那么这样的细胞已经用酶降解脱掉了________，这种酶可能是________酶。A、B到C细胞的过程中，常用的物理方法是________；融合完成的标志是__________________________；形成的D细胞还要应用________技术把D培养成植株。培养过程中，所用的固体培养基除了添加水、无机盐、糖等营养物质，还必须加入生长素和细胞分裂素等调节物质。

    抗蛇毒血清含有特异性抗体，具有中和相应蛇毒的作用。 用于蛇咬伤者的治疗，其中蝮蛇毒血清，对竹叶青蛇和烙铁头蛇咬伤亦有疗效。咬伤后，应迅速注射本品，愈早愈好。若通过单克隆抗体制备的方式获得大量的蝮蛇毒血清，请回答下列有关单克隆抗体制备的有关问题：

（1）图中A过程，从小鼠的脾脏中取得的“小鼠细胞”是________细胞，该细胞能够产生__________。从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射的特定的物质是________。

（2）图中B过程是细胞融合，该过程需要用灭活的________、聚乙二醇或电激等诱导。   

（3）__________________技术是单克隆抗体技术的基础。

（4）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是______________________________________________________________。

(5)选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的__________特点，又具备淋巴细胞的产生特异性抗体的特点。

(6)杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是_____________。

（1）ES细胞一般从囊胚的_______________分离得到。在培养ES细胞时，细胞充满培养皿底部后停止分裂，这种现象称为_______________。为获取更多的囊胚，首先要对供体母鼠注射相应激素，使其                      ，然后可用人工方法从小鼠体内获得囊胚，该过程称为__________________。

（2）ES细胞在功能上具有                   的特点；目前研究人员正尝试通过科技手段利用ES细胞经过特殊诱导，为因故失去手的患者提供新的“手”，该过程揭示了细胞             的机理。

（3）已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断，一般情况下，细胞中有D或S途径即能分裂增殖。人淋巴细胞中虽然有这两种DNA合成途径，但一般不分裂增殖。鼠ES细胞中只有D途径，但能不断分裂增殖。将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。若要从培养液中分离出杂种细胞，写出实验方法（不考虑机械方法），并说明理由。

方法：___________________________________________________________。

理由：___________________________________________________________。

(1) 述单克隆抗体制备过程中涉及 的细胞工程技术有        。

(2) 杂交瘤细胞中染色体数目与普通淋巴细胞相比具有的特点是     ，在HAT培养基上存活的细胞可能包括       （填下列序号）

①无抗体分泌的细胞   ②抗HPV抗体的分泌细胞     ③其它无关抗体的分泌细胞

(3) 对于抗体检测呈          性的杂交克隆应尽早进行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀释法，即稀释细胞到3～l0个细胞/mL，每孔加入细胞稀释液0. 1mL,使每个孔内不多于一个细胞，达到        克隆培养的目的。

(4) 由上述过程生产出的单克隆抗体不能直接用于人体，理由是         。

(5)科学家从某些无限增殖细胞的细胞质中分离出了无限增殖调控基因( p rG)，该基因能激发动物细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更多的思路。除本题描述的一种制备单克隆抗体技术外，请再简要写出一种制备单克隆抗体的思路                。