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            • 1. 组织型纤溶酶原激活剂(tPA)在人体纤溶和凝血的平衡调节中发挥着关键性的作用,如图是利用奶牛乳汁生产组织型纤溶酶原激活剂(tPA)的图解,据图回答下列问题:
              (1)过程①在构建的基因表达载体中,应将tPA基因首端与______基因的启动子等调控组件结合,③过程常用的方法是______.
              (2)要获得单个成纤维细胞,过程②需用______处理奶牛胎儿皮肤组织块.在单个组织细胞的培养过程中,为了防止杂菌污染,通常还要在细胞培养液中添加一定量的______.
              (3)成功进入成纤维细胞的tPA基因,最终在转基因牛C中维持稳定和表达的过程称为______,④涉及到的生物技术为______,得到的转基因牛C称之为转基因克隆动物.
              (4)从A到B过程中所用的胚胎工程技术是______.从个体水平上看,若______,则可确定转基因牛培育成功.
            • 2. 许多大肠杆菌的质粒上含有lacZ′基因(内含EcoRI的酶切位点),其编码的产物β-半乳糖苷酶在X-gal 和IPTG存在下,可以产生蓝色沉淀,使菌落呈现蓝色,否则菌落呈现白色.基因工程中常利用该原理从导入质粒的受体细胞中筛选出真正导入重组质粒的细胞,过程如图所示.请据图回答:
              (1)限制酶EcoRⅠ的识别序列和酶切位点是-GAATTC-,SmaⅠ的识别序列和酶切位点是-CCCGGG-.图中目的基因被切割下来和质粒连接之前,需在目的基因的右侧连接相应的末端,连接的末端序列是 ______ .
              (2)转化过程中,大肠杆菌应先用 ______ 处理,使其成为细胞.
              (3)菌落①②③中颜色为白色的是 ______ ,原因是 ______ .
              (4)菌落③中的目的基因是否表达,可采用的检测办法是 ______ .
            • 3.
              某一质粒载体如图所示,外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因,Tetr表示四环素抗性基因).有人将此质粒载体用BamHI酶切后,与用BamHI酶切获得的目的基因混合,加入DNA连接酶进行连接反应,用得到的混合物直接转化大肠杆菌,结果大肠杆菌有的未被转化,有的被转化.被转化的大肠杆菌有三种,分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌.

              ​回答下列问题:
              (1)质粒载体作为基因工程的工具,应具备的基本条件有 ______ (答出两点即可).
              而作为基因表达载体,除满足上述基本条件外,还需具有启动子和终止子.
              (2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选,在上述四种大肠杆菌细胞中,未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的,其原因是 ______ ;并且 ______ ______ 的细胞也是不能区分的,其原因是 ______ .在上述筛选的基础上,若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落,还需使用含有 ______ 的固体培养基.
              (3)基因工程中,某些噬菌体经改造后可以作为载体,其DNA复制所需的原料来自于 ______
            • 4.
              预防乙肝最有效的途径是接种疫苗.将乙肝表面抗原基因转移到植物细胞内可生产乙肝疫苗.回答下列问题.
              (1)欲在短时间内大量扩增乙肝表面抗原基因.通过 ______ (填写中文名称)技术,其原理是 ______ ,利用该技术扩增乙肝表面抗原基因的前提是 ______ .
              (2)将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法,此外采用 ______ 法十分简便经济.用抗原--抗体杂交技术检测植物细胞是否成功合成乙肝表面抗原蛋白,若有 ______ 出现,表明目的基因已形成蛋白质产品.
              (3)将乙肝表面抗原基因导入植物细胞后,采用 ______ 技术获得愈伤组织,该技术需在 ______ 条件下进行.
              (4)乙肝疫苗在2~8℃条件下保存,其不宜在常温下保存最可能的原因 ______ .
            • 5.

              1997年,科学家将动物体内的能够合成胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组,并且在大肠杆菌中表达成功。如下图,请据图回答问题。

              (1)此图表示的是采取人工合成目的基因的方法获取胰岛素基因的过程。图中DNA是以            为模板,   形成单链DNA,在         酶的作用下合成双链DNA,从而获得了所需要               。

              (2)图中②代表的是            酶,在它的作用下将质粒切出            末端。再以           酶连接形成重组质粒,重组质粒中除了胰岛素基因以外,还必须含有启动子,终止子和                ,这样才能构成一个完整的             。

              (3)图中④表示的过程是                    

            • 6.

              回答下列有关问题:

              (1)基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤,其中的核心步骤是_______________;

              (2)若要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞,先要将目的基因插入到农杆菌Ti质粒的_____中,然后用该农杆菌感染植物细胞,通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的_  _上。

              (3)植物组织培养的主要原理是植物细胞具有______,具体过程是在_______和人工控制条件下,将离体的植物器官、组织、细胞培养在人工配制的培养基上,给予适宜的条件,诱导其经过_______产生愈伤组织、丛芽,最终形成完整的植株。

              (4)在哺乳动物的核转移实验中,通过一定的措施将受体细胞激活,使其进行细胞分裂和发育,当胚胎发育到_________阶段时,将胚胎移入受体(代孕)动物体内.

              (5)生态工程是实现循环经济最重要的手段之一,请写出它遵循的基本原理(写出两项):________

            • 7.

              下图表示限制性核酸内切酶对DNA片段进行切割的示意图,请回答以下

              问题:

              甲:

              (1)图中甲和乙代表________.

              (2)EcoRⅠ、HpaⅠ代表________.

              (3)图中甲和乙经过相应操作均形成两个片段,切口的类型分别为________、________.

              (4)由图解可以看出,限制酶的作用特点是_________.

              (5)如果甲中G碱基发生改变,可能发生的情况是________.

            • 8. (15分)某一质粒载体如图所示,外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因,Tetr表示四环素抗性基因).有人将此质粒载体用BamHI酶切后,与用BamHI酶切获得的目的基因混合,加入DNA连接酶进行连接反应,用得到的混合物直接转化大肠杆菌,结果大肠杆菌有的未被转化,有的被转化.被转化的大肠杆菌有三种,分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌.

              ​回答下列问题:
              (1)质粒载体作为基因工程的工具,应具备的基本条件有 ______ (答出两点即可).
              而作为基因表达载体,除满足上述基本条件外,还需具有启动子和终止子.
              (2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选,在上述四种大肠杆菌细胞中,未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的,其原因是 ______ ;并且 ______ ______ 的细胞也是不能区分的,其原因是 ______ .在上述筛选的基础上,若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落,还需使用含有 ______ 的固体培养基.
              (3)基因工程中,某些噬菌体经改造后可以作为载体,其DNA复制所需的原料来自于 ______
            • 9.
              干扰素是治疗癌症的重要药物,它必须从血液中提取,每升人血只能提取0.5 μg,所以价格昂贵.现在美国加利福尼亚州的基因公司用如图的方式生产干扰素.阅读材料完成问题.

              干扰素基因在基因工程中称为 ______ .用PCR技术可使获得的基因迅速扩增.此基因与细菌的质粒结合,构建基因表达载体,然后用 ______ 方法将其导入酵母菌体内.
            • 10.
              研究人员欲对拟芥蓝叶片中某种蛋白质进行改造,使其能结合空气中微量的黄色炸药挥发分子,导致叶片产生特定颜色变化,从而有助于检测公共场所是否存在爆炸物.请回答:
              (1)研究人员从上述预期蛋白质的功能出发,设计蛋白质的 ______ 结构,然后推测相应目的基因的序列,最终人工合成出目的基因.
              (2)将目的基因插入到T1质粒的 ______ 上,通过农杆菌的 ______ 作用,导入拟芥蓝细胞.
              (3)在转基因植株附近放置 ______ ,从个体生物学水平鉴定出目的基因成功表达的转基因植株,然后利用 ______ 技术高效快速繁殖该基因植株,以移植于公共场所.
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