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苦马豆素(SW)最早是从植物灰苦马豆中分离获得,为了研究SW是否具有抑制肿瘤细胞生长的作用,学者做了大量研究,相关实验过程及结果如下:
① 取小鼠肝癌Hepal-6细胞;
② 制成单细胞悬液,等量接种于多孔板,加入等量细胞培养液,每组设5个平行孔;
③ 于37℃、5%CO2培养箱中培养24 h;
④ 加入等量不同浓度的SW溶液,于37℃、5%CO2培养箱中培养;
⑤ 分别在24 h、48 h、72 h时摇匀后吸取培养液,观察并记录结果,得到不同浓度的SW对细胞存活率的影响曲线,如图所示;
⑥ 将培养48h的培养液离心,细胞染色,在荧光显微镜下观察拍照,记录癌细胞和凋亡细胞的数目,并采用免疫荧光细胞技术检测细胞凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达量状况,汇总统计结果见下表。
培养48h后细胞数目及凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达水平
SW/μg·mL-1 | 癌细胞数目 | 凋亡细胞数目 | Bax蛋白 | Bcl-2蛋白 |
0 | ++++ | + | + | ++++ |
0.5 | +++ | ++ | ++ | +++ |
1 | ++ | +++ | +++ | ++ |
2 | + | ++++ | ++++ | + |
注:“+”的数量表示相对值的大小。
请回答下列问题:
(1) 实验中进行小鼠肝癌Hepal-6细胞培养的原理是____。培养箱中要有适量的无菌空气,原因是______________。肝癌细胞数量增多扩展时,细胞能相互重叠向三维空间发展,形成堆积物,可能的原因是________。
(2) 实验步骤③中“于37℃、5%CO2培养箱中培养24h”的目的是____________。
(3) 分析图中曲线可知,SW对肝癌Hepal-6细胞的作用效果是____________________________________________。
(4) 表中结果表明SW可以诱发细胞____,从而抑制肿瘤细胞生长。从两种蛋白质的表达水平来看,Bax蛋白和Bcl-2蛋白对癌细胞凋亡的作用分别是________。