【生物一选修1：生物技术实践】

   柿子经过发酵可制成柿子醋，以下是柿子醋制作的流程:柿果→挑选→清洗→去皮→去核→脱涩处理→切块→压榨→柿汁→灭菌→酒精发酵→醋酸发酵→灭菌→陈酿→淋醋→过滤→成品。请回答下列问题：

（1）脱涩过程可以用成熟的苹果、梨等水果释放的_____气体促进柿子成熟。

（2）将压榨后的柿汁加热到80℃保持10〜20分钟的目的是________。酒精发酵时可添加活性干酵母进行，发酵的原理是____     ____（写出反应式）。

（3）若醋酸发酵时需扩大培养醋酸菌种，实验室常用的接种方法是________________和_____________接种前应对培养皿、接种环和培养基进行灭菌，方法分别是______________。接种时应在火焰附近进行，同时设置空白培养基做对照，原因是_____                          。

【生物一选修1：生物技术实践】

 泡菜是四川人非常喜爱的家常小菜，新鲜的泡菜滤液中含有乳酸菌，可作为实验材料分离纯化乳酸菌。回答下列问题：

 (1)泡菜腌制一段时间后，泡菜坛中的盐水和蔬菜逐渐变酸，原因是                            。腌制过程中，要注意控制腌制的                 等条件，以防止亚硝酸盐的含量过高。

 (2)分离纯化乳酸菌时，需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释，这样做的目的是                                          。稀释后的泡菜滤液可用        法使菌液均匀接种在培养基表面，接种的全过程都应在           附近进行。

 (3)固体培养基会因加入适量碳酸钙后而不透明，但乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。纯化乳酸菌时应该挑取生长在平板          （选填表面或中下层）且周围出现                的菌落进一步分离。

[生物——选修1生物技术实践]

请回答下列与微生物培养相关的问题：

（1）土壤中具有分解尿素的细菌，此类细菌能产生________酶，该酶能将尿素分解成____________。

（2）某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下。将各种物质溶解后，用蒸馏水定容到1000ml，再经高温灭菌，制成固体培养基备用。

根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中能分解尿素的细菌？__________（填“能”或“不能”），原因是____________

（3）某小组采用平板划线法分离某样品的细菌时，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是_______________________________。使用稀释涂布平板法检测土样中细菌含量时，在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养一段时间，这样做的目的是___________。

（4）在分离尿素分解菌的实验中，大部分同学从培养基上筛选出大约50个菌落，而有一个同学从培养基上筛选出大约150个菌落，这种实验结果差异产生的原因可能是______________、_____________。

胡萝卜素是一种常用的食用色素，可分别从胡萝卜或产胡萝卜素的微生物菌体中提取获得，流程如下：

(1)筛选产胡萝卜素的酵母菌R时，可选用________或平板划线法接种。采用平板划线法接种时需先灼烧接种环，其目的是____________________。

(2)培养酵母菌R时，培养基中的蔗糖和硝酸盐可分别为酵母菌R的生长提供________和________。

(3)从胡萝卜中提取胡萝卜素时，干燥过程应控制好温度和________以防止胡萝卜素分解；萃取过程中宜采用________方式加热以防止温度过高；萃取液浓缩前需进行过滤，其目的是________________________________________________________________________。

(4)纸层析法可用于鉴定所提取的胡萝卜素。鉴定过程中需用胡萝卜素标准品作为________。

[生物—选修1：生物技术实践]

请回答有关物质提取、微生物培养与应用的问题：

（1）实验室分离叶绿体中的色素常用的方法是________，从胡萝卜中提取胡萝卜素常用的方法是________法。

（2）微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键是________。常用的对培养皿进行灭菌的方法是________。

（3）从土壤中分离尿素分解菌的过程中，应向以________为唯一氮源的培养基中加入________指示剂。

（4）纯化菌种和统计某活菌的数目时，宜采用的接种方法是________，用这种方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，其原因是________。

[生物——选修1:生物技术实践]

手机高温、潮湿的环境非常适合细菌的生长，由大肠杆菌引起的食源性疾病日渐成为社会比较关注的公共卫生问题。为了了解手机上大肠杆菌的种类及分布情况，某兴趣小组进行了如下实验步骤。请进一步完善实验内容并回答相关问题：

（1）实验步骤：

①配制含有                   、水、无机盐的固体培养基，并在培养基中加入少量         （使大肠杆菌菌落呈现黑色）；

②从10名学生的手机正、反面采集样品，分别接种至灭菌的培养基上，在37°C恒温培养箱中培养24〜48h，选取        的菌落；

③将接种针用         法灭菌后，将②中选取的菌落接种到       （填“固体”或“液体”）培养基，在恒温摇床上培养24h，使细菌大量繁殖；

④用        法将③过程所获得的细菌接种到培养基上，培养分别统计菌落的种类和数目；

⑤根据菌落的特征进一步鉴定大肠杆菌的类型。

（2）上述实验步骤中，从用途看，①所用培养基属于          培养基。

（3）上述实验步骤④统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是           。

【生物——选修1：生物技术实践】

   牛奶中富含蛋白质，长期饮用有助于增强体质，但牛奶同时也可能是某些疾病的传播载体。国家规定是每毫升牛奶中细菌数应小于两百万个。以下是牛奶消毒及细菌检测实验。请回答下列问题：

（1）图中步骤①称为________消毒法。步骤②是________。

（2）培养基中的蛋白胨可以为微生物提供________。进行步骤③操作时，应选用下列哪种工具进行涂布？________。为了避免杂菌污染，此步骤应在________附近进行。

（3）将接种后的培养基和作为对照的________同时放入37℃恒温培养箱中，培养36小时。取出后统计各平板的菌落数，结果如表所示。应该选择其中稀释倍数为________的平板进行计数，经过消毒后的牛奶中，细菌数大约是________个／毫升。

[生物——生物技术实践]

幽门螺杆菌是栖息在胃粘膜的革兰氏阴性螺旋状杆菌，具有强的脲酶（能降解尿素）活性，其代谢类型属于异养厌氧型（氧气浓度在5％~8％左右适合，完全无氧或空气环境中无法生存），这种细菌是慢性胃炎、甚至胃癌发生的元凶。

（1）为了对胃炎患者的胃粘膜提取物稀释样液中幽门螺杆菌进行分离，应将样品稀释液接种于以________为唯一氮源的固体选择培养基上，接种后的培养皿在________条件下，倒置于37℃的恒温培养箱中培养。

（2）分离培养幽门螺杆菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，培养基常用的灭菌方法有________。

（3）欲检测上述培养基中是否具有幽门螺杆菌这类细菌的存在，向培养基中添加酚红指示剂，培养基中菌落周围显示红色环带，即表明这类细菌的存在，这种检测过程的机理是________。

（4）采用液体培养基培养幽门螺杆菌，为了测定菌液中的菌体数量，一般采用________法将一定量的菌液接种到固体培养基上，统计________的数量来代表菌体数，这种检测方法测得的结果一般偏________（填“大”或“小”），原因是________。

尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)，培养基成分如表所示，实验步骤如图所示，请分析回答问题：

(1)此培养基能否用于植物组织培养?________理由________________________________。

(2)培养基中加入尿素的目的是筛选到________________，这种培养基从功能上属于________培养基。

(3)“目的菌”生长所需的氮和碳分别来自培养基中的________、________，其营养方式是________________。

(4)下图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图。则获得图A效果的接种方法是________________，图B效果的接种方法是________________，一同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是________________________。

(5)在进行分离分解尿素的细菌实验时，某同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落，该同学的实验结果产生的原因可能有________(填序号)。

①由于土样不同   ②由于培养基污染   ③由于操作失误   ④没有设置对照

（1）显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用              染色。微生物A产生的油脂不易挥发，可选用                         （填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”）从菌体中提取。

（2）为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以                         为碳源的固体培养基进行培养。

（3）若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用                 直接计数；若要测定其活菌数量，可选用                    法进行计数。

（4）为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35℃、40℃、45℃温度下降解10g油脂所需酶量依次为4mg、1mg、6mg，则上述三个温度中，          ℃条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕            ℃设计后续实验。