[生物——选修1：生物技术实践]该模块暂不命题。

【生物——选修1：生物技术实践】

请回答下列与苹果酒和苹果醋制作相关的问题：

（1）制作苹果酒过程中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物难以存活，是因为发酵液中的环境条件是________。

（2）图所示装置的充气口在制作苹果酒过程中，应该________，在制作苹果醋的过程中，应该________。排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连，这样做的原因是________。

（3）利用苹果酒制作苹果醋，应如何控制温度：________。

（4）制作苹果醋的过程中，使用的醋酸菌可以从食醋中分离纯化获得，图所示操作是利用________法进行接种，在操作过程中应注意的事项有下列哪几项________（填序号）。

①每次划线前和结束时都需要灼烧接种环；②灼烧接种环后，待其冷却后再划线；③第二次及以后的划线，要从上一次划线的末端开始划线；④最后一次划线不能和首次划的线相接触。

（5）分离纯化获得菌种后，可采用________的方法长期保存菌种。

植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。刚果红（CR溶液）可以与纤维素形成红色复合物,但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。用含有CR的培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的透明圈 。

为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了如下培养基（成分见下表）：注：“+”表示有，“－”表示无。

[生物一选修1：生物技术实践】

图示为稀释涂布平板法的操作流程。请回答下列问题：

   (1)实验室获得纯净培养物的关键是________________________。

   (2)图示流程的主要操作包括________________和________________。

   (3)一般选择菌落数在__________的平板进行计数，结果比较准确。

   (4)当培养基中纤维素成为唯一碳源时，可筛选出________________。要证明其有选择作用，可以用______________________作对照，比较菌落目：还可以在培养基中加入刚果红染料，如果_____________________，也证明其选择作用。

我国家电研究院的洗衣机专家指出，洗衣机内部的环境非常潮湿，洗衣机使用时间越长，内部滋生微生物的机会就越大。看似干净的洗衣机其实内部隐藏着一个健康的隐形杀手。某生物兴趣小组的同学，利用内桶背面的污垢进行了相关实验。下图是某同学分离和培养洗衣机中微生物的部分操作步骤和实验结果示意图。

（1）图1所示的是制备固体培养基时的实验操作步骤之一，该操作称为           ，若用该培养基培养洗衣机中滋生的细菌时，除考虑各种营养条件外，还要考虑          和渗透压等条件（至少写两个）。

（2）图2是平板划线法接种操作示意图，操作顺序是A→B→             （用字母和箭头表示）；以上操作中存在错误的步骤是              （用字母表示）。

（3）在培养洗衣机中细菌的实验中，应在接种前检测固体培养基是否被污染，具体检测的方法是                                       。

（4）将以上接种后的平板置于培养箱中培养时需倒置,原因是                     。

（5）在检测洗衣机的污垢中是否含微生物时，也有同学先将污垢制成一定浓度的水样溶液，然后用移液枪取0．lml菌液滴入平板，并用涂布器涂布到固体培养基的表面进行培养，这种方法称为       。经一段时间培养后，该同学统计发现该培养皿中共有57个菌落（如图3），他得出的结论是0．lml菌液中有57个细菌，你认为他的判断是否正确并说明原因                                                     。              

（6）实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，此目的是             。

尿素是一种重要的农业肥料，需经细菌的分解才能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题，请分析回答：

（1）培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、氮源、        和无机盐。而从土壤中分离分解尿素细菌时提供的唯一氮源是         。

（2）通常培养基采用________________法灭菌，在制备固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒置，目的是___________________

(1)培养基中除了添加植酸钙以外，还应含有________、________、水、无机盐等基本营养物质。

(2)为防止杂菌污染，要对培养基和培养皿等进行____________，而且须将接种后的培养皿呈________状态放置。

(3)接种以前进行的一系列操作，目的是在培养皿表面形成________。根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的________就能大致推测出样品中的活菌数。

(4)由于植酸钙的不溶解性，使培养基中形成白色浑浊。产植酸酶的菌株会水解植酸钙，菌落的周围将形成透明的区域，根据透明区域的有无，可初步判断该菌是否产植酸酶。实验结果显示A～E五种菌株中，________是产植酸酶的理想菌株。

(5)获得目的菌以后，若要用于植酸酶的生产，还需要进行________。

(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白干板先行培养了一段时间，这样做的目的是__________________________；然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为________。

(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过________灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是                                      。

(3)示意图A和B中，________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。

       A　　　　　　　　　　B

(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中________的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高________的利用率。

 玉米（2N=20）是重要的粮食作物，经深加工可生产酒精、玉米胚芽油等产品。下面图甲表示玉米深加工流程，图乙表示为了获得玉米新品种常采用的一种育种方式，请回答下列问题。

　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　
（1）玉米秸秆中的纤维素在纤维素酶的作用下最终被水解成葡萄糖才能供给酵母菌利用，纤维素酶是由3种组分组成的复合酶，其中的________可将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维素分解菌能合成纤维素酶，人们常常是从土壤中分离纤维素分解菌。分离纤维素分解菌常用的方法是_________；其实验流程是：土壤取样→选择培养→____   __→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落。

（2）使用选择培养基从土壤中分离纤维素分解菌，对培养基的要求是_____________。如果还要对土壤中该类微生物进行计数，则接种方法是_________________________。

（3）玉米胚芽油不易挥发，宜选用压榨法或________法从玉米胚芽中提取。

（4）在育种过程中，若改变图乙‚过程所使用的培养基中的____________________，则可能不会形成愈伤组织，而是形成胚状体。若愈伤组织没有形成根，但分化了芽，其原因可能是____________________

40【生物—选修3：现代生物科技专题】 (15分)

2015年，屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法获奖。工业上青蒿素一般从青蒿植株中提取,产量低，价格高。基因工程及细胞工程等为培育出高青蒿素含量的青蒿提供了思路。科学家先通过紫外线处理大量青蒿幼苗后，偶然发现一株高产植株。通过基因测序发现该高产植株控制青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变。

（1）提取了高产植株的全部DNA后，要想快速大量获得该突变基因可以采用PCR技术，该技术的原理是____________。

（2）如果用青蒿某个时期mRNA反转录产生的双链cDNA片段，用该双链cDNA进行PCR扩增，进行了30个循环后，理论上可以产生约为__________个DNA分子，该双链与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做青蒿的________________,获得的cDNA与青蒿细胞中该基因碱基序列___________（填“相同”或“不同”）。

（3）将获得的突变基因导入普通青蒿之前，先构建基因表达载体，图l、2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答：

用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是___________ ，构建好的重组质粒在其目的基因前要加上特殊的启动子，启动子是__________识别结合位点。

（4）检测目的基因是否表达出相应蛋白质，应采取____________技术。目的基因导入组织细胞后，通过                      技术培育出青蒿幼苗。

(1)接种前需要对培养基及培养皿等进行灭菌，常用的灭菌方法是________。培养基中加入化合物A的目的是筛选__________。

(2)实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是________。

(3)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量________的培养液，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量__________。

(4)转为固体培养时，为获得单菌落进行继续筛选，常采用平板划线法或________法。用后者对微生物进行计数时，得到的数值往往比实际的活菌数                   （填“大”或“小”），原因是                                                                                                                                             。

(5)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过________处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。

(6)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法

是_____________________________________________________________。