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            • 1.
              有些细菌可分解原油,从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题:
              (1)在筛选过程中,应将土壤样品稀释液接种于以 ______ 为唯一碳源的固体培养基土,从功能上讲,该培养基属于 ______ 培养基。
              (2)纯化菌种时,为了得到单菌落,常采用的接种方法有两种,即 ______ 和 ______ 。
              (3)为了筛选出高效菌株,可比较单菌落周围分解圈的大小,分解圈大说明该菌株的降解能力 ______ 。
              (4)通常情况下,在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、 ______ 和 ______ 。无菌技术要求试验操作应在酒精灯 ______ 附近进行,以避免周围环境中微生物的污染。
            • 2.

              苹果醋具有营养丰富,增强机体免疫力,护肤养肝等多种功效,以鲜苹果汁为原料利用发酵瓶制作果酒和果醋的过程简图如下图1,请分析回答:

                           图1                                图2

              (1)过程甲中发酵温度控制在​                   ,经过10~12天后,样液中是否产生酒精,可以用            来检验。

              (2)利用苹果酒制作苹果醋的化学反应方程式是                          。

              (3)过程乙中使用的醋酸菌可以从食醋中分离纯化获得,操作过程中利用平板划线法进行接种,在操作过程中应注意的事项有下列哪几项____________(填序号)。

              ①每次划线前和结束时都需要灼烧接种环;②灼烧接种环后,待其冷却后再划线;③第二次及以后的划线,要从上一次划线的末端划线;④最后一次划线不能和首次划的线相接触。

              (4)为了保持菌种的纯净,对于长期需要保存的菌种,可以采用            的方法。

              (5)某同学尝试自己利用图2装置制果醋,制作过程中排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连,这样做的原因是                           。

            • 3.

              经人工诱变获得的天冬氨酸缺陷型菌株,菌体自身不能合成天冬氨酸,必须从外界环境中获取天冬氨酸才能生长繁殖。下图是科研人员利用“影印法”筛选天冬氨酸缺陷型菌株的部分过程(注:基本培养基中不含氨基酸,完全培养基中含所有种类的氨基酸)。回答下列问题:


                  (1)过程①接种的方法是________________。待测培养皿中的培养基是___________(答“基本”或“完全”)培养基。

                  (2)过程②是将印在同一块丝绒布上的菌落,先后转印至两个不同的平板上。该过程应该先转印到_______________(答“基本”或“完全”)培养基上,原因是____________________。

                  (3)完成②过程的转印并在28℃的培养箱中培养2天后,两个平板上出现的菌落有的相同,有的不同。完全培养基上出现的菌落A和菌落B中,不可能是天冬氨酸缺陷型菌株的是_________菌落(答“A”或“B”),原因是___________________。

                  (4)为了进一步鉴定筛选到的菌株确实是天冬氨酸缺陷型菌株,科研人员又制备了甲、乙两个平板,这两个平板中营养成分的差异是________________。将待鉴定菌种接种到两个平板中,置于适宜条件下培养一段时间后,若观察到两个平板中菌落的生长情况是__________,则说明该菌株是天冬氨酸缺陷型菌株。

                  (5)临时保存该菌种时,可将菌种接种到试管的______上,在合适的温度下培养。长期保存时可采用________的方法。

            • 4.

              如图是分离、纯化及保存枯草芽孢杆菌菌株的过程示意图:将土壤表层土稀释液煮沸5 min(枯草芽孢杆菌的芽孢不会失去活性)静置5 min后获得样品,进行如下操作:

              请回答下列问题:

              (1)由题意可知,除用选择培养基外,还有________操作起到筛选作用。

              (2)上图的划线操作中,培养基从物理状态分类上属于______________,接种环用__________________法进行灭菌,划线过程中第一区和最后一区的划线________(填“能”或“不能”)相连。

              (3)用稀释涂布平板法在5个培养基平板上,均接种稀释倍数为104的样品液0.1 mL,培养一段时间后,平板长出来的菌落数分别为13,160,532,175和187。每毫升样品中的细菌数量为____________个。

              (4)用上述方法统计出的菌落数往往比样品中活菌的实际数目______,原因是____________________________________________________________________。

            • 5.

              土壤中含有大量的难溶性磷酸盐,为了从土壤中筛选出能够将难溶性磷酸盐转化为植物能吸收的可溶性磷的优良解磷菌株,以便将其添加到有机肥中,改善植物磷元素供应。科研人员进行如下实验:

              实验原理:

              固体培养基中难溶性磷酸盐在微生物的作用下溶解,会在菌落周围形成透明圈(如图),透明圈直径(D)与菌落直径(d)的比值(D/d)代表微生物溶解磷的能力大小。

              实验步骤:

              步骤1  取某地区土样5g制得土壤溶液后稀释,取稀释液1mL接种到基础培养基A上,在适宜温度下培养72h。

              步骤2 在基础培养基A上用接种环挑取代表性菌落再次接种,培养3~4d后观察菌落特征和透明圈的大小,初步筛选出三种优良解磷菌株(如表)。

              分析回答:

              (1)从物理形态看,培养基A属于_______培养基。培养基中磷源应该是______________。

              (2)步骤1中接种方法是__________________,步骤2中接种环的灭菌方法是________。

              (3)根据实验结果可以确定溶解磷能力最强的菌株是_____________。

              (4)为进一步测定初步筛选的三种菌株实际溶解磷的能力,研究人员将它们接种到基础培养基B中,并在37℃、200 r·min-1 摇床培养,定期取上清液,测定溶液中可溶性磷含量,得到下图所示曲线。

              ①用摇床进行培养的好处是___________________________________________。

              ②结果表明最优良的解磷菌株是_______________。

            • 6.

              I.现有五种不同的抗生素(甲、乙、丙、丁、戊),要测它们对金黄色葡萄球菌的作用效果。图1表示在均匀接种了金黄色葡萄球菌的固体培养基上,分别于不同位置加入2mg不同的抗生素的实验结果(图中●为添加点)。图2表示这五种抗生素对成人产生毒副作用的剂量。请回答:



                            图1                                                  图2


              (1)由图1可知,_______种抗生素的抗菌效果最好。

              (2)如果给予剂量为2mg,那么________种抗生素最适宜成人使用,理由是_____________。

              (3)已知丁种抗生素作用的原理是抑制金黄色葡萄球菌细胞壁的形成,由此推测该种抗生素对成人的毒副作用较小的可能原因之一是___________________________。

              (4)为保证培养基上能均匀地生长出一层金黄色葡萄球菌,将菌液接种到固体培养基上时宜进行____________(填“涂布平板”或“平板划线”)操作。实验过程中,与用于计数的平板接种不同的是本实验要保证滴加到培养基上的菌液_______________,以缩短培养时间。

              (5)本实验过程中所使用的无菌技术,除用来防止培养物(金黄色葡萄球菌)被其他外来微生物污染外,还能_______________。



              II.人血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值。科研人员通过生物工程技术获得转HSA基因母牛,以便通过乳腺生物反应器生产HSA,其主要技术流程如图1所示。请回答:


                                                          图1


              (1)如图1所示,将牛胎儿成纤维细胞核移入去核卵母细胞中,该技术称为_________技术;供核的牛胎儿成纤维细胞通常选用传代10代以内的细胞,其原因是_________________________。

              (2)胚胎移植时,为使代孕母牛能处于适合的生理状态,需要用激素对其进行_______处理。

              (3)采用SRY-PCR法进行性别鉴定的基本程序是提取牛胎儿成纤维细胞的DNA,经PCR反应体系扩增SRY基因(Y染色体上特有的性别决定基因)片段,然后用SRY特异性探针对扩增产物进行检测。

              ①PCR反应体系中除含缓冲液、模板DNA、dNTP(包含dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、引物以外,还应含有____________;其中,dNTP的作用是____________________________________,引物应选用图2中的________(填图中标号,图2中I、II、III、IV是引物,箭头是延伸方向)。




                                            图2


              ②若扩增产物含大量SRY基因片段,则该种牛胎儿成纤维细胞______(填“能”或“不能”)用作图1所示技术流程中转化过程的受体细胞。

            • 7. 苯酚是工业生产排放的有毒污染物质,自然界中存在着能降解苯酚的微生物.某工厂产生的废水中含有苯酚,为了降解废水中的苯酚,研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株,筛选的主要步骤如图所示,①为土壤样品,请回答下列问题:

              (1)②中培养菌株的选择培养基中应加入________作为碳源,②中不同浓度碳源的培养基________(A.影响;B.不影响)细菌的数量,如果要测定②中活细菌数量,常采用______________法.

              (2)④为对照,微生物在④中不生长、在⑤中生长,④与⑤培养基的主要区别在于_______________;使用____________法可以在⑥上获得单菌落.采用固体平板培养细菌时进行倒置培养是为了防止                             .

            • 8.

              请分析回答下列问题:(1)无菌技术主要通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。常用的灭菌方法有____________灭菌、干热灭菌和________灭菌。

              (2)稀释涂布平板法分离纯化土壤中微生物的正确操作步骤是        (        )

              ①土壤取样  ②称取10 g土壤加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中制备土壤提取液 

              ③吸取0.1 mL溶液进行平板涂布  ④依次稀释至101、102、103、104、105 、106、107稀释度

              A.①②③④         B.①③②④     C.①②④③         D.①④②③

              (3)利用酵母菌将葡萄汁发酵后是否有酒精产生,可以用重铬酸钾来检验,在酸性条件下,重铬酸钾与酒精反应呈______色。在发酵过程中,随着酒精度的提高,发酵液逐渐呈现深红色,原因是______________________.

              (4)酵母菌适合生活在偏酸性环境,而放线菌则适合生活在偏碱性环境中,分离二者所用的培养基称为____________。

              (5)在腐乳制作的过程中,起主要作用的微生物是____________。

              (6)腐乳制作过程中影响其风味和品质的因素有哪些 (        )

              ①盐的用量  ②酒的种类和用量③发酵温度  ④发酵时间  ⑤香辛料的用量

              A.①②③④⑤     B.①②③     C.①②⑤       D.③④




            • 9.

              在生产研究上,常常需要进行微生物的培养和计数。回答下列与微生物的培养与利用有关的问题

              (1)下图是利用______________法将微生物接种到固体培养基上,把混合的菌种逐步稀释分散获得______________菌落。接种后培养基应______________放在37℃恒温培养箱中进行培养。

              分析下面培养基的配方:NaNO3、KH2PO4、NaH2PO4、MgSO4•7H2O、KCl、H2O。若此培养基用于筛选尿素分解菌,则应除去上述培养基成分中的________,并加入______________和________物质,以补充其生活所需的碳源和氮源。培养基中加入酚红作指示剂的原因是尿素分解菌能合成________将尿素分解为氨,使培养基pH发生改变,酚红由黄变红,使菌落周围呈现红色。

              (3)三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量。在对应稀释倍数为106的培养基中,取0.2ml稀释液涂布,得到以下统计结果:

              甲同学涂布了1个平板,统计的菌落数是260;

              乙同学涂布了三个平板,统计的菌落数是210、240和246,取平均值232;

              丙同学涂布了三个平板,统计的菌落数是21、212和256,取平均值163;

              在三位同学的统计中,____________同学的统计结果是相对准确可信的。按照该同学的结果,每毫升原液中的菌体数是______________。用这种方法测得的菌体数比实际活菌数量______________。

            • 10.

              塑料袋造成的“白色污染”早已成为地球公害,塑料袋的自然分解需要20-1000年不等.2008年7月3日加拿大媒体报道:16岁的高中生丹尼尔-伯德从土壤中找到了一类假单胞杆菌,能将聚乙烯塑料的自然降解过程缩短至3个月,而且分解产物只有水和二氧化碳.伯德也因此被誉为“塑料袋的克星”.以下是伯德寻找到聚乙烯降解菌的大致过程.请回答:

              (l)根据你的生活经验推测,伯德这项研究的“土壤样品”最可能取自于______.
              (2)图中“…”表示对土壤悬浮液进行一系列的梯度稀释,目的是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞.从而能在Ⅰ号培养基表面形成单个______.接种培养后,统计菌落数,通常活菌的实际数目要比统计的菌落数_______。

              (3)对培养基灭菌的常用方法是________________。接种前需要检测使用的培养基是否被污染,方法是__________________________。

              (4)I号培养基属于______培养基,其作用是使目的菌能“脱颖而出”.如图采用的接种方法为______.

              (5)使用Ⅱ号培养基的目的是使目的菌数目增多,若对目的菌进一步培养,则其增长呈____型曲线增长。Ⅱ号培养基中必须包含水、无机盐、______等基本营养成分.从物理性质来看,Ⅱ号培养基中________(填“不能”或“能”)添加琼脂.假设该同学发现培养基上细菌数目过多连成一片,说出一种可能的原因并提出合理的处理措施。原因:__________________________;

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