3.
溶菌酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。将人类溶菌酶基因导入奶牛成纤维细胞的细胞核中,通过克隆技术获得重组细胞,再培育该细胞可获得转基因克隆奶牛,人们可以从这种转基因克隆奶牛的乳汁中分离提纯人类溶菌酶。请根据所学知识回答下列问题:
(1)将人类溶菌酶基因导入奶牛成纤维细胞的细胞核中时,需要用到的工具酶有______,要使该基因只在奶牛的乳腺细胞中选择性表达,构建基因表达载体的过程中要在目的基因前接上______;将目的基因导入奶牛受体细胞常用的方法是______。
(2)通过克隆技术获得重组细胞时,选择的卵母细胞必须发育到______期。
(3)科研人员通过______工程来设计改变酶的构象。
(4)在研究溶菌酶的过程中,得到了多种突变酶,测得酶50%发生变性时的温度(Tm),部分结果见表:
酶 | 半胱氨酸(Cys)的位置、数目 | 二硫键 | Tm/℃ |
野生型T4溶菌酶 | Cys51,Cys91 | 无 | 41.9 |
突变酶C | Cys21,Cys143 | 1 | 52.9 |
突变酶F | Cys3,Cys9,Cys121,Cys142,Cys164 | 3 | 65.5 |
(注:Cys上角的数字表示半胱氨酸在肽键的位置)
溶菌酶热稳定性的提高,是通过改变______和增加______得以实现的。