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            • 1． 如图表示中国科研人员对树鼩精原干细胞进行遗传修饰后，通过自然交配获得世界首只转基因树鼩的过程．请回答下列问题：

              （1）培养精原干细胞时，定期更换培养液的目的是防止 ______ 对自身细胞代谢造成障碍，通入二氧化碳的作用是 ______ ．
              （2）图中涉及的基因工程的核心步骤是 ______ ，通常采用 ______ 技术将GFP基因导入树鼩精原干细胞．
              （3）利用PCR技术扩增GFP基因需要 ______ 酶，外源的GFP基因能在树鼩体内表达的原因是 ______ ．
              （4）图示过程与通过体外受精培育转基因动物相比，避免了将受精卵移入 ______ 中继续培养的麻烦，同时也克服了胚胎发育到 ______ 时期进行胚胎移植的难题．
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            • 2． 请回答与动物细胞培养基胚胎工程有关的问题：
              （1）欲获得牛的单个体细胞，需用 ______ 处理动物组织，在体外培养时，通常需在培养液中添加 ______ 等天然成分．
              （2）获取的卵子需培养到 ______ 时期才能用于核移植，通过核移植获得的动物称为 ______ ．
              （3）在胚胎分割技术中，需将牛囊胚的 ______ 均分，可利用囊胚的 ______ 细胞进行性别鉴定．
              （4）ES细胞在 ______ 上或含有抑制因子的培养基上培养时，不会发生分化；可用ES细胞分化出人造器官用于器官移植，优点是 ______ ．
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            • 3． 某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性．供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞．请回答下列有关动物细胞培养的问题：
              （1）在动物细胞培养时，通常在合成培养基中加入适量 ______ ．细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是 ______ ．
              （2）在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长 ______ ．若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用 ______ 消化处理．
              （3）为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的 ______ ．
              （4）已知癌基因X过量表达与肝肿瘤的发生密切相关，要试验一种抗肿瘤药物Y对甲细胞生长的影响，可将甲细胞分为A、B两组，A组细胞培养液中加入 ______ ，B组细胞培养液中加入等量无菌生理盐水，经培养后，从A、B两组收集等量细胞，通过分别检测X基因在A、B两组细胞中的 ______ 合成水平的差异，确定Y的药效．
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            • 4． 回答下列问题：
              如图所示为动物细胞培养过程中，动物细胞增殖情况的变化曲线（图中B、D两点表示经筛选后继续培养），请据图回答下面的问题：
              （1）OA段的培养称为 ______ 培养，AB段可能发生了 ______ 现象，需要用 ______ 酶处理，以使组织细胞分散开来．
              （2）为制备单克隆抗体，需将 ______ 注射到小鼠体内，以此获取 ______ 细胞，同时可选取图中 ______ 点的细胞与该细胞融合形成杂交细胞，所选取细胞的细胞膜上的 ______ 比正常细胞显著减少．
              （3）为筛选出能够产生单克隆抗体的杂交细胞，可用 ______ 培养基达到目的．杂交瘤细胞具有 ______ （特点）
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            • 5． 如图是动物细胞培养的基本过程示意图．请根据图回答：

              （1）容器B中的动物组织用 ______ 处理，是为了使细胞分散开制成细胞悬液．
              （2）培养首先在C瓶中进行，这时的细胞培养称为 ______ ，悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为 ______ ．细胞进行有丝分裂，数量不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的 ______ ．
              （3）细胞培养需满足的条件有：无菌无毒的环境，即对培养液和所有的培养用具进行无菌处理，通常在培养液中添加一定量的 ______ ，此外，应定期 ______ ，以便清除代谢产物．营养除了通过合成培养基满足已知的外，还需要添加 ______ 满足不知的成分．需要适宜的温度和酸碱度，满足气体条件，培养瓶或培养皿置于 ______ 的混合气体中培养．其中CO2的主要作用是维持培养液的 ______ ．
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            • 6． 随着生物科学技术的发展，动物的生殖方式变得越来越多样化．如图是胚胎工程技术研究及应用的相关情况，供体1是良种荷斯坦高产奶牛，供体2是健康的黄牛，请据图回答下列问题：

              （1）应用1中获得的良种小牛，细胞核遗传物质来源于 ______ 个体，性别为 ______ ．
              （2）在应用2、3、4中，若要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行处理，使其 ______ ，得到的卵母细胞需要发育至 ______ 时期才能受精．
              （3）应用3可解决良种动物快速大量繁殖的问题；对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意将 ______ 均等分割，否则将影响分割后胚胎的恢复和进一步发育．之后的胚胎移植要保证成功，需对供、受体母畜注射相关激素进行 ______ ，移植时要选择发育良好，形态正常的 ______ 胚．
              （4）应用4中细胞进行定向诱导，可分化形成各种组织和器官．在胚胎干细胞培养过程中除需要适宜的温度、无菌、无毒等环境条件以外，营养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、核苷酸，还要加入 ______ ；向培养液中通入95%空气和5%二氧化碳，空气中的氧气参与细胞的代谢，二氧化碳可以维持培养基的 ______ ．
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            • 7． 肥胖已经严重危害人类健康．为研究发酵大麦提取物对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响，科研人员进行了相关实验．
              （1）3T3-L1前脂肪细胞在胰岛素（INS）、地塞米松（DEX）和3-异丁基-1-甲基-黄嘌呤（IBMX）的诱导下，基因 ______ 表达，分化为成熟脂肪细胞，因此经过三种物质诱导的3T3-L1前脂肪细胞是肥胖研究常用的细胞模型．
              （2）3T3-L1前脂肪细胞培养液中除了具有基本的营养外，还需加入一定量的 ______ ，并置于 ______  中培养．
              （3）将一定数目的植物乳杆菌接种到经过 ______ 处理的粉碎过筛大麦和水的混合液中，制备发酵大麦提取物（LFBE）．除不接种植物乳杆菌外，其余操作方法相同，制备未发酵大麦提取物（RBE）．
              （4）研究发酵大麦提取物对细胞分化的影响，实验处理及结果如下．（表格中+表示加入了该物质，-表示未加入）
                      组别

              处理方法              		 模型组 空白组 对照组（提取物浓度ug/mL） 实验组（提取物浓度ug/mL）
              100 200 400 100 200 400
              培养液 + + + + + + + +
              1 ______ + - - - - - - -
                2 ______ - - + + + - - -
                3 ______ - - - - - + + +

              ①表格处理方法1、2、3分别是 ______ 、 ______ 、 ______ ．
              ②分析实验结果，说明 ______ ．
              （5）为进一步研究LFBE抑制3T3-L1前脂肪细胞分化的机理，科研人员提取各组细胞中总RNA，经 ______ 过程获得cDNA，再利用PCR技术扩增出肥胖相关基因．在相同条件下，PCR产物的量可以间接反映细胞中 ______ 的含量．若检测结果是 ______ ，则说明LFBE抑制相关基因转录从而抑制3T3-L1前脂肪细胞分化．
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            • 8． 请回答下列问题：
              （1）约翰格登于1962年通过实验把蝌蚪已分化体细胞的细胞核移植进入卵母细胞质中，并成功培育出“克隆青蛙”．由于动物细胞的全能性会随着动物细胞 ______ 程度的提高而逐渐受到限制，直到今天也还不能用类似 ______ （某种植物细胞工程的技术手段）的方法获得完整的动物个体．因此，约翰格登培育“克隆青蛙”，实际是通过 ______ （某种动物细胞工程的技术手段）来实现的．“克隆青蛙”和“试管婴儿”所共需的胚胎工程技术有 ______ ．
              （2）山中伸弥于2006年把4个关键基因通过逆转录病毒转入小鼠的成纤维细胞，使其变成多功能干细胞．在该技术中，逆转录病毒是这4个关键基因进入成纤维细胞的 ______ （基因工程的工具），它能够携带外源基因进入受体细胞，并整合到其染色体的DNA上．该操作过程中，除了需要逆转录病毒外，还需要的操作工具有 ______ 、 ______ ．
              （3）卡罗琳斯卡医学院2012年10月8日宣布，将2012年诺贝尔生理学或医学奖授予约翰格登和山中伸弥，以表彰他在“体细胞重编程技术”领域作出的革命性贡献．所谓“体细胞重编程技术”即将成年体细胞重新诱导同早期干细胞状态，即获得iPS细胞，iPS细胞与胚胎干细胞一样，具有发育的 ______ ，即可以分化为成年动物体内任何一种组织细胞．目前获得iPS细胞的方法除上述两种之外，常见的还有以下两种：一是诱导成年体细胞与胚胎干细胞 ______ 产生四倍体细胞；二是应用 ______ 技术（动物细胞工程的技术手段）将生殖细胞置于特定条件下进行培养．
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            • 9． 回答下列有关动物细胞培养的问题．
              （1）在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到表面 ______ 时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的 ______ ．此时，瓶壁上形成的细胞层数是 ______ ．
              （2）随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止；但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成 ______ 细胞，该种细胞的黏着性 ______ ．
              （4）检查某种毒素是否能改变细胞染色体的数目，最好选用处于有丝分裂 ______ 期的细胞进行显微镜观察．
              （5）在细胞培养过程中，通常在 ______ 条件下保存细胞．因为在这种条件下，细胞 ______ 的速率降低．
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            • 10． 动物细胞的培养常用于生理、病理、药理等方面的研究．如图示动物细胞培养的部分过程：
              （1）图示中A与B处理所用的物质是 ______ ．
              （2）在细胞的分裂增殖过程中，为了确定DNA合成的时间长短，加入以3H标记的 ______ （腺嘌吟、鸟嘌吟、胞嘧啶、胸腺嘧啶）．
              （3）图中分装的过程称为 ______ 培养（原代培养还是传代培养）．
              （4）在细胞的贴壁生长过程中，正常情况下，到一定阶段会出现 ______ 现象．
              （5）在动物细胞培养液中，除了一般的营养物质外，往往还必须添加 ______ ．
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