1975年，英国科学家米尔斯坦和德国科学家科勒设计了一个极富创造性的实验方案：把一种B淋巴细胞与能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞进行融合，得到的融合细胞就能大量增殖，产生足够数量的特定抗体。请回答下列问题：

（1）从动物体内取出的组织块，需用________处理一段时间，这样组织就会分散成单个细胞。当细胞________（填“原代”或“传代”）培养至10～50代左右时，部分细胞的细胞核型可能发生变化，从而获得骨髓瘤细胞。在动物细胞培养基中加入血清、血浆等天然成分的原因是________。

（2）制备单克隆抗体时，先用特定的选择性培养基进行筛选，获得________细胞,然后对上述细胞进行抗体检测，选取________的细胞克隆化培养；最终获得单克隆抗体。

（3）有人提出用核移植技术构建重组细胞来生产单克隆抗体，其过程是取经特定抗原刺激的B淋巴细胞的细胞核，移植到去核的________细胞中，构成重组细胞。此方法________（填“能”或“不能”）获得既能分泌抗体，又能无限增殖的细胞，原因是________。

近年来，我国死于狂犬病的人数有上升趋势。狂犬病病毒的核酸是RNA，机体感染病毒后产生的特异性IgG抗体，能消灭狂犬病病毒，这是接触狂犬病病毒后及时注射疫苗和特异抗体的重要依据。我国利用地鼠的肾细胞培养狂犬病疫苗，已取得良好效果。

请根据上述材料，回答下列问题：

(1)巴斯德利用固定毒株制成减毒活疫苗，预防狂犬病，制成减毒活疫苗需要用________培养。

(2)特异性抗体获取可用单克隆抗体制备。在制备单克隆抗体的过程中，应用的动物细胞工程技术是______________________________________________。

①图中A过程从小鼠的脾脏中取得的“小鼠细胞”是________细胞，该细胞能够产生________。从小鼠体内提取分离该细胞之前，给小鼠注射的特定的物质是________。

②图中B过程是细胞融合，该过程需要用灭活的________、聚乙二醇或电激等诱导。

③特异性抗体获取的方法也可以采用向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。与这种方法制备的抗体相比，单克隆抗体具有________________________________________等优点。

(4)动物细胞体外培养需要满足的环境条件有_________________________。

(5)单克隆抗体的制备还有哪些用途？_______________________________________。

科学家从哺乳动物早期胚胎中分离出一类胚胎干细胞(ES细胞)，并进一步将ES细胞诱导分化为某些组织细胞。回答下列问题：

(1)胚胎干细胞(ES细胞)可由囊胚的__________________________分离培养获得，其可产生多种多样的细胞的根本原因是__________________。

(2)获得的动物细胞进行培养时，一般需控制在10代以内，原因是__________________________。

(3)离体培养胚胎干细胞时，一般需要在合成培养基中加入____________等天然成分，培养时所需的气体主要有O₂和CO₂，CO₂的主要作用是______________。

(4)研究发现，细胞因子能够调控某动物干细胞分化。放线菌素D能通过阻碍RNA聚合酶的功能进而抑制细胞因子的调控，由此推断该抑制过程发生在____________(填"复制""转录"或"翻译")水平。

(5)研究还发现，胚胎干细胞可以诱导分化为造血干细胞等各种细胞，这体现了胚胎干细胞具有__________________的特点，临床上可用诱导干细胞定向分化的方法修补损伤或衰老的组织器官，从而解决______________问题。

(1)ES细胞能分化出成体动物的所有组织和器官，这体现了ES细胞的_____________。为获得适合人体移植的猪器官，减弱或消除排斥反应，可对ES细胞进行___________。

(2)—个ES细胞变成ES细胞群的过程中，细胞_________(填“可能”、“不可能”)出现接触抑制现象。下列关于动物细胞培养和核移植的叙述，正确的是__________。

A.从原代培养物或细胞系中选择和纯化无法获得细胞株

B.动物细胞培养基中添加胰岛素的目的是调节血糖浓度

C.胚胎干细胞培养时，加滋养层是为了抑制胚胎干细胞分化

D.核移植形成的重组细胞在初次分裂时核基因不转录

(3)为获得含兔褐毛基因的转基因小鼠，可将褐毛基因通过_________法导入ES细胞核中，再将该核移植到去核的卵细胞中，经过_____________、胚胎培养、胚胎移植，最终由代孕母鼠产下克隆小鼠。

(4)为获得大量的上述克隆小鼠，可用转基因的小鼠胚胎成纤维细胞进行体细胞克隆。因为含有褐毛基因的胚胎成纤维细胞可进行__________培养，理论上可获得无限个转基因小鼠。

（一）回答与果酒、果醋制作有关的问题。

（1）在酿酒过程中，酵母菌只有在无氧条件下才能进行__________。发酵开始时，发酵瓶内看不到气泡冒出的原因可能是酵母菌的________使发酵瓶内出现负压。

（2）下列各项中，与果酒中的酒精浓度有关的是 ____________________（多选）。

A.发酵时间                                     B.发酵温度

C.培养液中糖的含量                  D.酵母菌对酒精浓度的耐受程度

（3）不同地域所酿制的葡萄酒风味会有一定的差异，出现风味差异的原因除了与当地相应的土壤、气候等地理环境因素和葡萄品种有关外，还可能与不同地域酿酒时所用的_____________________等生物因素有关。

（4）在利用果酒制作果醋过程中，如果已获得醋化醋杆菌菌种，可先在液体培养基中进行·              培养，然后接种到发酵瓶中。发酵瓶下口直角玻璃管内塞有松紧合适的脱脂棉球，其作用是_______________。开始收集果醋前，应检测发酵瓶流出液的_____________________。

（二）毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIF-Ⅱ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转 KIF-Ⅱ 基因的高绒质绒山羊的简单流程如图：

（1）转基因过程用到的工具酶有___________和_______________________。

（2）在过程②中，用_________________处理将皮肤租住分散成单个成纤维细胞。由于人们对动 物细胞所需营养物质还没有完全搞清楚，因此在培养细胞时需在培养基中加入一定量的 __________________________ ，在培养过程中，应将培养瓶置于_____________________中培养。

（3）要获得多只相同的转基因山羊， 可对图中早期胚胎进行___________后进行胚胎移植。

（4）下列有关基因工程的叙述，正确的是______________________  。

A.切割目的基因和载体DNA 时为获得相同的粘性末端，必须用相同的核酸内切酶

B.基因工程的原理是基因重组，其核心是上图中的过程④

C.图示过程获得的转基因绒山羊并不是克隆动物

D.重组表达载体上含有 RNA 聚合酶的识别位点

“生物导弹”是免疫导向药物的形象称呼，由单克隆抗体与药物配合而成。单克隆抗体能自动导向，在生物体内与特定目标细胞或组织结合，并由其携带的药物产生治疗作用。单克隆抗体的制备过程如下图所示，分析回答下列问题：

(1)图中A过程是从小鼠的脾脏中取得____细胞，提取该细胞之前，给小鼠注射的特定物质相当于______；B过程得到的杂交瘤细胞的特点是__________________。

(2)体外培养杂交瘤细胞的培养基与用于植物组织培养的培养基在物理性质上的主要区别是前者要用____，从培养基的成分来看，前者培养基中除了添加必要的营养物质外还需要加入含天然成分的____________。

(3)特异性抗体也可以通过常规方法来制备：向动物反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物的血清中分离所需抗体。与这种常规方法相比，单克隆抗体具有____________________________等优点（答出三点即可）。制备单克隆抗体的过程中至少需要____次对细胞的筛选。

科学家从病死的家禽和候鸟体内分离到了H₅N₁禽流感病毒，用以生产可以预防和治疗禽流感的抗体，如图为单克隆抗体制备过程示意图，图中A～F分别表示生物技术或细胞名称，请回答有关问题：

（1）若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自感染               的动物或人的细胞，C过程不同于诱导植物原生质体融合的常用诱导因素是                ．

（2）假设仅考虑某两个细胞的融合，则可能形成3种类型的D细胞，因此需用       培养基筛选出既能             又能产生              的E细胞用于培养．

（3）在动物细胞培养过程中培养液中必须通入气体氧气和二氧化碳，通入CO₂的目的是维持培养液的             ．随着细胞分裂次数的增多，就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的             ，需要用             等处理使细胞从瓶壁上分离下来．

（6）人体细胞表达的干扰素与转基因家蚕细胞表达的干扰素的氨基酸序列相同，根本原因是                            。