我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：

（1）过程①必需用到的酶是___________________________________。  

（2）重组质粒除了带有绿色荧光蛋白基因以外，还必须含有启动子、终止子和_____________________才能构成一个完整的基因表达载体。

（3）为了获得更多的猪卵母细胞，可通过对母猪注射促性腺激素的方法，做_________处理，并将所采集到的卵母细胞在体外培养到________________________期即可通过显微操作将其细胞核去除。

（4）我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程运用了哪些现代生物技术_        _________________________________________________________。

  (1)核移植的受体细胞一般选用____________________________________细胞。进行相关显微操作时，一般用微型吸管一并吸出细胞核和__________。

  (2)细胞在体外培养时，除培养液提供必需的营养条件、适宜的温度和pH、气体环境外，还需要有无菌、无毒环境，为保证无菌、无毒环境，在培养液中通常要加入__________。此外，还应定期__________。以便清除代谢废物。

  (3)现有一段人工合成的正常胰岛素基因的脱氧核苷酸序列，可利用PCR技术扩增正常胰岛素基因，该技术的原理是______________。将正常胰岛素基因导入胚胎干细胞通常采用________法。

  (4)“定向诱导”的本质是_____________________________________________________。

（1）哺乳动物的体外受精主要包括[a]_____、[b]______和受精等几个主要步骤。若要充分发挥优良母畜的繁殖潜能，可给供体注射________，使其排出更多的卵子。

（2）通过过程c构建好的重组质粒在其目的基因前要加上特殊的启动子，启动子是_______识别、结合位点。d过程常用的方法是_________。

（3）e过程的名称为_________，其实质是________________________。若要一次获得多只完全相同的转基因牛，应采用胚胎分割技术，通常选择发育良好、形态正常的_________或桑椹胚。

下面是畜牧业生产上培育某种优良种牛的两种方法，请分析回答：

(1)方法Ⅰ和方法Ⅱ均用到的生物技术有________________和__________________。

(2)用激素处理的目的是使B牛__________，从B牛体内获得的卵子需要培养到________________________(时期)才能与精子结合。

(3)A牛的精子必须在B牛的生殖道中经过相应的生理变化后，才能与B牛的卵子结合，完成受精作用，这个过程叫____________。卵子受精的标志是在卵细胞膜和透明带的间隙能够观察到______________。

(4)生产上常用__________期的胚胎进行胚胎移植。若希望同时获得多个性状相同的家畜个体，可以使用________技术。

下图为牛胚胎移植的基本程序，请据图回答：

（1）图中 a、 b、 c 过程分别是指               、              、              。

（2）在胚胎移植过程中， 供、 受体母牛选择好后， 要用激素进行              处理,这样处理的原因是供体和受体生殖器官的生理变化相同，为胚胎移入受体提供了相同的生理环境，以保证移植的胚胎能够继续正常发育。

（3）为了提高牛胚胎的利用率以获得更多的小牛， 常采取的方法是              ；处理的时期是              和              

（4）从哺乳动物早期胚胎或原始性腺中分离出来的细胞，称为ES或EK细胞。这类细胞的形态特征有              。

随着科学技术的发展,人们可以根据人类的需求来改造生物的性状,在许多领域取得了可喜的成果,图中是利用奶牛乳汁生产血清白蛋白的图解,据下图回答:

（1）在此工程过程中涉及的细胞水平的现代生物技术主要有________、_________。

（2）如果②的数量太少常用___________来扩增。在②进入③之前要构建基因表达载体，用到的工具酶有___________。

（3）能实现②进入③的常用方法是_____________。

（4）⑦是⑥生出的后代，而⑦的遗传性状和荷斯坦奶牛最相似,原因是______________________。要实现⑦批量生产血清白蛋白，则要求③的性染色体组成是_______。

I.现有五种不同的抗生素（甲、乙、丙、丁、戊），要测它们对金黄色葡萄球菌的作用效果。图1表示在均匀接种了金黄色葡萄球菌的固体培养基上，分别于不同位置加入2mg不同的抗生素的实验结果（图中●为添加点）。图2表示这五种抗生素对成人产生毒副作用的剂量。请回答：

              图1                                                  图2

（1）由图1可知，_______种抗生素的抗菌效果最好。

（2）如果给予剂量为2mg，那么________种抗生素最适宜成人使用，理由是_____________。

（3）已知丁种抗生素作用的原理是抑制金黄色葡萄球菌细胞壁的形成，由此推测该种抗生素对成人的毒副作用较小的可能原因之一是___________________________。

（4）为保证培养基上能均匀地生长出一层金黄色葡萄球菌，将菌液接种到固体培养基上时宜进行____________（填“涂布平板”或“平板划线”）操作。实验过程中，与用于计数的平板接种不同的是本实验要保证滴加到培养基上的菌液_______________，以缩短培养时间。

（5）本实验过程中所使用的无菌技术，除用来防止培养物（金黄色葡萄球菌）被其他外来微生物污染外，还能_______________。

                                            图1

（1）如图1所示，将牛胎儿成纤维细胞核移入去核卵母细胞中，该技术称为_________技术；供核的牛胎儿成纤维细胞通常选用传代10代以内的细胞，其原因是_________________________。

（2）胚胎移植时，为使代孕母牛能处于适合的生理状态，需要用激素对其进行_______处理。

（3）采用SRY-PCR法进行性别鉴定的基本程序是提取牛胎儿成纤维细胞的DNA，经PCR反应体系扩增SRY基因（Y染色体上特有的性别决定基因）片段，然后用SRY特异性探针对扩增产物进行检测。

①PCR反应体系中除含缓冲液、模板DNA、dNTP（包含dATP、dCTP、dGTP、dTTP）、引物以外，还应含有____________；其中，dNTP的作用是____________________________________，引物应选用图2中的________（填图中标号，图2中I、II、III、IV是引物，箭头是延伸方向）。

                              图2

②若扩增产物含大量SRY基因片段，则该种牛胎儿成纤维细胞______（填“能”或“不能”）用作图1所示技术流程中转化过程的受体细胞。

（下图为胚胎移植的基本程序、早期胚胎发育过程（图甲），及经过体外受精和胚胎分割移植培育优质奶牛的过程（图乙）．请回答下列问题

（2）图甲中标号1为             ，它将来可发育为                   。

（3）图乙中A细胞是               ，在进行体外受精前要对精子进行          处理。哺乳动物受精过程有哪些机制阻止多精子入卵受精？（  ）

B．精子穿越卵子透明带触及卵黄膜，导致透明带反应

（5）受体母牛必须和供体牛属于                  。移植后的胚胎能在受体子宫中存活的生理基础是                              。

2015年2月3日，英国议会下院通过一项历史性法案，允许以医学手段培育“三亲婴儿”。三亲婴儿的培育过程可选用如下技术路线。

据图回答下列问题：

（1）由于女性的自然周期产生的卵子太少，捐献者在取卵前通常需要注射____________激素，促使一次有更多的卵泡发育。

（2）重组细胞需培养到MⅡ中期的原因是该时期的卵母细胞才具备________________，重组细胞体外培养所需的气体主要是O₂和CO₂，CO₂的主要作用是___________________。

（3）从受精卵到三亲婴儿的培育还需要_________________和___________________等技术。胚胎发育的卵裂期在 _________（填“透明带”或“放射冠”）内进行。受精卵经72小时体外培养发育成32细胞左右的胚胎，叫做____________，可用于胚胎移植。

（4）为了某些需要，需对胚胎的性别进行鉴定。目前最有效最准确的方法是SRY- PCR法，操作的基本程序是：从被测的囊胚中取出几个 __________      （填“滋养层”或“内细胞团”）细胞，提取DNA为模板；然后用位于Y染色体上的性别决定基因（即SRY基因）的一段核苷酸序列作 ______________，在Taq酶的催化作用下进行PCR扩增；最后与 SRY特异性探针出现阳性反应者，胚胎为__________性。

某课题组为解决本地奶牛产奶量低的问题，引进了具高产奶基因但对本地适应性差的纯种公牛。

（1）拟进行如下杂交：

 ♂A（具高产奶基因的纯种）×♀B（具适宜本地生长基因的纯种）→C选择B作为母本，原因之一是胚胎能在母体内正常_________________。 为获得产奶量高且适宜本地生长的母牛，根据现有类型，最佳杂交组合是__________________________。

（2）用以上最佳组合，按以下流程可加速获得优良个体。

精子要具有受精能力，需对其进行___________处理；卵子的成熟在过程__________(填序号)中完成。 为筛选出具有优良性状的母牛，过程⑤前应鉴定胚胎的____________________________。

（3）为了提高已有胚胎的利用率，可采取______________________技术。