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内皮素(ET)是一种含21个氨基酸的多肽,具有强烈的血管收缩和促进平滑肌细胞增殖等作用,其功能异常与高血压、糖尿病、癌症等有着密切联系.内皮素(ET)主要通过与靶细胞膜上的ET受体(ETA)结合而发挥生物学效应.科研人员通过构建表达载体,实现ETA基因在大肠杆菌细胞中的高效表达,其过程如图所示,图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因,限制酶Apa I的识别序列为CCC↓GGG,限制酶XhoI的识别序列为C↓TCGAG (识别序列均只写出单链).请据图分析回答:
(1)进行过程①时,需要加入缓冲液、引物、脱氧核苷酸和
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酶等.完成过程①②③的目的是
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(2)过程③和⑤中,限制酶XhoI切割DNA,使
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键断开,形成的黏性末端是
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.用两种限制酶切割,获得不同的黏性末端,其主要目的是
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(3)构建的重组表达载体,目的基因上游的启动子是
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识别和结合的部位,进而可驱动基因的转录.除图中已标出的结构外,基因表达载体还应具有的结构有复制原点和
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(4)过程⑥要用
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预先处理大肠杆菌,使其成为容易吸收外界DNA的感受态细胞.
(5)将SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因,其目的是有利于检测
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.该融合基因进入受体大肠杆菌内,并且在其中维持稳定和表达的过程,称为
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(6)基因工程操作时可将外源基因整合到叶绿体基因组中,不仅能有效改良植物的品质,还由于叶绿体转基因
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,从而在一定程度上避免转基因作物中的外源基因能扩散到其他同类作物.