（I）大肠杆菌是与我们日常生活联系非常密切的细菌，请回答有关检测饮用水中大肠杆菌的问题：

（1）检测饮用水中大肠杆菌的含量时，通常将样品进行一系列的梯度稀释，将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，然后记录菌落数量，这种方法称为_____________。判断下面所示的4个菌落分布图中，不可能是用该方法得到的是__________________。

（2）用上述方法统计样本中菌落数时是否需要设置对照组？__________（填“需要”或“不需要”），其原因是需要判断培养基___________，对于固体培养基应采用的检测方法是将________________的培养基在适宜的温度下放置一段时间，观察培养基上是否有菌落产生。

（3）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行________（填“消毒”或“灭菌”）处理；操作者的双手需要进行清洗和________________；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使其内蛋白质变性，还能损伤它的____________的结构。

（4）检测大肠杆菌实验结束后，使用过的培养基及其培养物必须经过________________处理才能丢弃，以防止培养物的扩散。

35.（II）   根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

（1）限制性核酸内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有________和________。

AATTC……G

G……CTTAA

为使载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性核酸内切酶切割，该酶必须具有的特点是________。

（3）反转录作用的模板是____________，产物是__________。若要在体外获得大量反转录产物，常采用________技术。

（4）基因工程中除质粒外，________和______也可作为载体。

（5）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是_________________________。

李斯特菌广泛存在于各类食品中，李斯特菌在李斯特菌显色培养基上培育时菌落会呈现蓝绿色。在目前发现的16种李斯特菌中单增李斯特菌是唯一对人有致病性的一种，与其他李斯特菌相比，单增李斯特菌还能合成并分泌磷脂水解酶，使培养基中的磷脂被分解而在单增李斯特菌菌落周围出现白色晕环。

（1）与单增李斯特菌相比，其他李斯特菌不能合成并分泌磷脂水解酶的根本原因是_____________________。

（2）现要检测某食品中是否含有其他李斯特菌和单增李斯特菌，进行了相关实验：

①将该食品样品加入经___________灭菌的李斯特菌选择培养液中培养，培养的目的是_________________。

②将经过培养的菌液接种到鉴定李斯特菌的培养基上，常用的接种方法有___________________。鉴定李斯特菌的培养与李斯特菌选择培养液相比，还需额外添加显色剂、__________和__________。

③将接种后的培养基置于适宜条件下进行培养。一段时间后若培养基上出现___________的菌落，则说明该食品中含有单增李斯特菌。

中国家电研究院的洗衣机专家指出，洗衣机内部的环境非常潮湿，洗衣机使用时间越长，内部滋生微生物的机会就越大。看似干净的洗衣机，其内部隐藏着一个健康的隐形杀手。某生物兴趣小组的同学，利用内桶背面的污垢进行了相关实验室实验。

（1）培养洗衣机内部微生物的培养基中一般含有_____________

（2）鉴定洗衣机污垢中是否有菌落时要制备固体培养基，在制备完毕后要进行倒平板操作，将平板倒置。这样做的目的是_______________________

（3）用稀释涂布平板法统计样本菌落数时是否需要对照组？目的是？_________________________________

（4）判断污垢中微生物的种类可以依据菌落的形状、大小等菌落特征进行初步的____________。实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，此目的是_________________。

(1)筛选产胡萝卜素的酵母菌R时，可选用______________或平板划线法接种。采用平板划线法接种时需先灼烧接种环，其目的是______________________。

(2)培养酵母菌R时，培养基中的蔗糖和硝酸盐可分别为酵母菌R的生长提供________和________。

(3)从胡萝卜中提取胡萝卜素时，干燥过程应控制好温度和________以防止胡萝卜素分解；萃取过程中宜采用________方式加热以防止温度过高；萃取液浓缩前需进行过滤，其目的是__________________。

(4)纸层析法可用于鉴定所提取的胡萝卜素。鉴定过程中需用胡萝卜素标准品作为____________。

皮肤作为人体最大的器官，拥有达1.8m²的表面积，其主要功能是作为物理屏障，保护机体免受外来生物或有毒物质的侵害。同时，皮肤也是人体与外界环境接触的部位，因此常驻有各类微生物，包括细菌、真菌和病毒等。通过微生物培养技术能了解我们皮肤表面的微生物分布情况。回答下列问题：

(1)微生物生长繁殖所需要的营养物质有碳源、水、_________、_________四大类。由于不同种类微生物的菌落特征表现不同，因此可以利用_________（填“固体”或“液体”）培养基来培养，通过观察菌落特征对微生物进行初步的鉴定和分类。

(2)有同学通过制备牛肉膏蛋白胨固体培养基来培养附着在皮肤表面的细菌。制备该培养基的操作步骤是：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。在溶化之后、灭菌之前需要调节______；灭菌后，待培养基冷却至______℃左右时，在酒精灯火焰旁倒平板；待平板冷却凝固后，需要将平板____________。

(3)利用平板划线法分离纯化某细菌的操作中，使用________法对接种环进行灭菌。第二次及其后的划线都要从上一次划线的末端开始，目的是____________。

有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染．某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株．回答问题：

（1）亚硝酸盐在特定的条件下会转变成致癌物—— _________。

（2）倒平板时，要将冷凝后的平板倒置的原因是___________________________ 。

（3）统计微生物数目常用的两种方法是_________________和_________________。

（1）像其他微生物一样，酵母需要适当的营养和合适的环境条件，培养时培养液中的营养物质主要有 ____________________等。(要求回答4种营养物质)

（5）为筛选和纯化酵母菌，根据用途应选用 __________________培养基，常用的接种方法 _______和 _________．扩大培养过程中需要对酵母菌进行计数，取0.2mL样品，用固体培养基对其培养，最后统计了三个平板，菌落数分别是200、180、220．则样品中微生物的数量为 ______________个/mL．该统计结果 ____________（低于、高于）实际值。

回答下列与微生物有关的问题：

（1）在进行微生培养时，为了观察微生物的菌落特征，一般选用______（固体或液体）培养基；为了判断培养基是否成功灭菌，需要将________的培养基放在________培养。

（2）为了从土壤中筛选出能降解尿素的菌株，需要用到__________的选择培养基。

（3）为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在培养基上加入__________染液，将筛选获得的菌液稀释后接种到________（从用途上分析）培养基，然后挑选出产生__________的菌落作为菌种进行扩大培养。

（4）实验结束后，使用过的培养基应该________处理后才能倒掉。

国家生活饮用水卫生标准规定：接种1 mL水样在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，在37℃下经24 h培养，所生长出的菌落总数不得大于100。某兴趣小组对某蓄水池进行细菌总数测定，以了解池水是否符合饮用水卫生标准。回答下列问题：

（1）用无菌三角瓶取水样前，取样器（玻璃制品）需使用_____________法灭菌。取水前的这种无菌操作的目的是____________________________。

（2）牛肉膏蛋白胨培养基灭菌后，需要冷却到50℃才能用来进行_________操作，冷凝后倒置培养。

（3）该小组通过滤膜法测定细菌总数，将30 mL水样平均分成3份进行过滤，再将3份滤膜分别放在牛肉膏蛋白胨培养基上培养。在培养过程中，不同时间所观察到的平板上菌落特征的差异有____________（至少写出两点）。为保证可信度，应进行对照实验，对照组与实验组的区别之处是_________________ 。

（4）在37℃下经24 h培养，结果如下表：

据上表结果判断，所取水样测定结果_____（填“符合”或“不符合”）饮用水的标准。

（5）该小组若想检测水样中大肠杆菌的数目，可将滤膜放在含__________培养基上，计算培养基上______（颜色）菌落的数目。