5．
小立碗藓是一种苔藓植物,易培养,被广泛应用于生物学实验研究,又因其同源重组的效率很高,已成为研究基因功能的良好材料。请回答下列问题:
(1) 甲同学在使用高倍镜观察小立碗藓的叶绿体时,发现在适宜条件下细胞中的叶绿体长时间静止不动,最可能的原因是______。
(2) 乙同学用小立碗藓进行了如下实验操作:
步骤一:在洁净的载玻片中央加一滴清水,放置一片小立碗藓的小叶,盖上盖玻片。
步骤二:从盖玻片一侧滴入0.3g·mL-1的蔗糖溶液,在盖玻片的另一侧_______,这样重复几次。
步骤三:在显微镜下观察,若发现叶绿体向细胞中间聚拢,说明_____________。
(3) 同源重组在细胞中可自然发生,交叉互换的位点必须发生在特定的同源序列中,原理如图1所示。已知由硫酸盐降解酶(K基因编码)催化某种硫酸盐(APS)的降解是高等植物中硫酸盐利用的关键步骤。有人提出,植物体中还存在着该硫酸盐降解的支路(PAPS),但不能确定其相关酶是否在植物体中存在。科研人员利用小立碗藓进行了以下研究:
图1 ① 测定K基因两侧的碱基序列。若测得在序列“5'…CGACCCGGGAGT…3'”中含有一个6个碱基对的限制酶Sma Ⅰ的识别序列,可推知该酶的识别序列为____。
图2
② 质粒pcDNA3上有Neo基因(新霉素抗性基因)和限制酶Sma Ⅰ、Tth11 Ⅰ和Bsm Ⅰ的酶切位点,如图2所示。为了使Neo基因能与K基因发生同源重组,应选用限制酶_______将Neo基因从质粒上切下来,然后在该基因的两侧增加与K基因两侧相同的____,构建具有Neo基因的表达载体。
③ 制备小立碗藓的原生质体,将其放在____溶液中,利用聚乙二醇介导直接将Neo基因表达载体导入小立碗藓细胞内。
④ 在添加了____的培养基中培养上述小立碗藓细胞,若能够发育成完整的植物体,则表明该植株已没有K基因。若通过此转化途径得到的植株__________,说明在小立碗藓中存在PAPS支路。