苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题:

（1）酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K₂HPO₄、MgSO₄、苯酚和水，其中可作为碳源的有_____________，该培养基属于_______培养基。

（2）将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐______，以达到富集酚降解菌的目的。

（3）小明同学采用_________________法进一步分离纯化目的菌，该方法先需要用________________对菌液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由

是_______________。制备该步骤中用的培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加_____________。

（4）下图为______________法示意图，在图中_________（填图中序号）区域更易获得单菌落。

（1）挑选可疑菌落制片后，用_________________观察，可看到呈竹节状排列的杆菌。

（2）对配制的液体培养基等需采取_________________灭菌；实验所用液体培养基的碳源为___________（填“无机碳”或“有机碳”）。

（3）接种可疑菌后，35℃培养24h，液体培养基变浑浊，原因是______________________，对照组试管中应加入_________________，与实验组同时培养6h后，若实验组液体培养基的浑浊度比对照组___________（填“高”或“低”），则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除。

（4）对排除的疑似患者及易感人群，可接种炭疽杆菌疫苗，刺激机体产生相应抗体．与产生抗体相关的细胞除T细胞、B细胞外，还有_____________和__________________。

（1）芳香油溶解性的特点是不溶于水，易溶于有机溶剂，因此可用            法提取芳香油。柠檬芳香油的提取常用            法。

（2）玫瑰精油的提取过程中，分离油层和水层的器皿是            。

（3）鉴定尿素分解菌的方法是在以尿素为唯一氮源的培养基中加入                    （试剂），鉴定纤维素分解菌的方法是         法。

（4）制作果酒和果醋的实验流程：挑选葡萄→            →榨汁→            →醋酸发酵

（5）灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括                    。

【生物——选修1：生物技术实践】 

欲从土壤中筛选出能产生脲酶的微生物并予以纯化计数，采用了下图所示的基本操作流程，请回答下列问题：

（1）微生物的培养基为微生物生长提供的营养成分往往包括__________________________和特殊营养物质五大类，取得土样后应先用___________（填试剂）对土壤进行梯度稀释，然后将稀释涂布在平面培养基上，这种选择培养基在营养组成上的重要特点是_____________。在这样的培养基上长出的细菌_________（填“一定”或“不一定”）都能产生脲酶。若在平板中加入酚红，目的菌落出现的变化是________。

（2）若要对相应微生物进行计数，一个稀释度应涂布2到3个平板，并计算_______。若稀释不够高，所得的数据与实际值比较应__________（填“偏大”“偏小”或“相等”）。经涂布获得的菌落可以采用平板划线法进一步纯化，接种时接种环在使用前要先灼烧，其目的是____________________，每次划线之间也要灼烧接种环，其目的是__________________________________，第二次及其后的划线都要从上一次划线的末端开始，其原因是__________________________________。获得的纯化菌种可以保存在试管中，塞上棉塞或盖上封口膜，不能密封，原因是________________________________。

Ⅰ．转基因克隆猪已在我国培育成功。研究组首先从猪胚胎皮肤细胞中分离出纤维细胞，进行体外培养。通过电穿孔的方法将构建好的基因表达载体转入纤维细胞，经筛选后将转基因纤维细胞进行体细胞克隆，再将重组胚胎移入代孕母猪子宫内，最终获得转基因克隆猪。请回答：

（1） 在对猪纤维细胞进行培养时，需要在细胞培养液中添加一定量的           ，以防止培养过程的污染。此外，应定期更换培养液，防止              对细胞自身造成危害。

（2） 筛选转基因细胞时，需要用到基因表达载体中的                。

（3） 在进行体细胞克隆前，先要从屠宰场收集猪卵巢，采集             ，并在体外培养成熟。然后将转基因纤维细胞核注入           中，再经过一系列过程获得含有目的基因的重组胚胎。

（4） 为了提高重组胚胎的利用率，可对处于           阶段的胚胎进行均等分割，再将重组胚胎移入代孕母猪子宫中继续发育成转基因克隆猪。一般地，代孕母猪需要用激素处理，促使其           以利于受孕。

Ⅱ．土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源。现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答：

（1） 分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，常用的灭菌方法有              （至少答2种）。

（2） 可用                法分离纯化得到能降解尿素的菌种。在接种活菌的过程中，要在          旁进行操作，接种后的培养皿            于37℃的            中培养。

（3） 用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌，若培养基中存在分解尿素的细菌，其菌落周围会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生的            使PH升高，使酚红指示剂产生颜色变化，从而证明这一菌株以尿素为氮源。变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力                 。