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            • 1.

              下图1为某种常用质粒的序列图,Lac Z基因编码的酶能使无色的X—gal变为蓝色,Amp为氨苄青霉素,抗性基因。图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列。请回答下列问题:


              (1)若要筛选成功导入目的基因的重组质粒,培养基中应加入的物质有_________________和_________________,构建重组质粒时需要的工具酶有___________________________,对获取的目的基因可用_________________技术对其扩增。

              (2)实验小组用BamH I和Blg II两种限制酶切割目的基因和质粒,构建重组质粒后导入大肠杆菌中,在筛选重组质粒的培养基上,若大肠杆菌菌落显蓝色,说明导入了______________________。没有导入任何外源DNA的大肠杆菌______________(填“能”或“不能”)在该培养基上生存。

              (3)将若干个质粒和目的基因用BamH I和Blg II两种限制酶切割后,用DNA连接酶相连,然后再用BamH I和EcoR I切割成功连接后的产物,获得了长度为0.7kb、2.8kb、1kb和2.5kb四种长度的DNA片段,则目的基因的长度为____________kb(已知目的基因的长度大于1kb,1kb=1000个碱基对)。

            • 2.

              编码蛋白甲的DNA序列(序列甲)由A、B、C、D、E五个片段组成,编码蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段组成,如图1所示。

              回答下列问题:

              (1)现要通过基因工程的方法获得蛋白乙,若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的DNA序列(TTCGCTTC—T……CAGGAAGGA),则所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋向乙,原因是____________________________________________________。

              (2)某同学在用PCR技术获取DNA片段B或D的过程中,在PCR反应体系中加入了DNA聚合酶、引物等,还加入了序列甲作为__________,加入了________作为合成DNA的原料。

              (3)现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白,要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T淋巴细胞增殖的作用,某同学做了如下实验:将一定量的含T淋巴细胞的培养液平均分成四组,其中三组分别加人等量的蛋白甲、乙、丙,另一组作为对照,培养并定期检测T淋巴细胞浓度,结果如图2。

              ①如图2可知:当细胞浓度达到a时,添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加,此时若要使T淋巴细胞继续增殖,可采用的方法是______。细胞培养过程中,培养箱中通常要维持一定的CO2浓度,CO2的作用是______。

              ②仅根据图1、图2可知,上述甲、乙、丙三种蛋白中,若缺少________(填“A”“B”“C”“D”或“E”)片段所编码的肽段,则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果。

            • 3.

              某实验室做了下图所示的实验研究,请据图回答:



               

              (1)与纤维母细胞相比,过程①形成的诱导干细胞的全能性较_____________。 

              (2)过程②是诱导干细胞中基因_____________的结果。 

              (3)过程③需要用_____________进行筛选,得到的Z细胞还需进行_____________培养和_____________,经多次筛选,就可以得到足够数量的能分泌所需抗体的细胞。 

              (4)科学家找到一种“无限增殖调控基因”能激发细胞不断分裂,通过基因工程技术将该基因导入待定的_____________细胞(填细胞名称),来制备单克隆抗体,基因导入并成功表达后,该细胞将具有__________________________的特点,在上述操作中用到了PCR扩增仪,其作用是_____________。 

            • 4. 近几十年来,植物基因工程取得相当大的进展,科学家将药用蛋白转向植物生产,科学家研究用转基因马铃薯生产人的血清白蛋白,如图表示EcoR I、BamH I 两种限制酶在质粒上的切割位点,两种酶识别和切割位点见表格。回答下列相关问题:

              限制酶

              识别序列和切割位点

              EcoR I

              G↓AATTC

              BamH I

              G↓GATCC

              (1)该工程中不适宜用来切割质粒的限制酶是_________,原因是____________________________________。

              (2)血清白蛋白基因可以从利用反转录法构建的______                     ___文库中获取。利用PCR技术扩增血清白蛋白基因时,设计引物序列的主要依据是________________________________,还需要在引物的一端加上__________________序列,以便于后续的剪切和连接。

              (3)将目的基因和质粒进行连接后,需先用_________处理农杆菌以便将目的基因导入马铃薯细胞,筛选含有目的基因的细胞需在培养基中添加_________。

              (4)从含有血清白蛋白基因的马铃薯细胞中提取血清白蛋白,需通过脱分化培养到愈伤组织,培养过程中需在培养基中添加的植物激素是_____________。

            • 5. 已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒,该病毒表面的A蛋白为主要抗原,制备抗A蛋白抗体的部分流程如下图。请回答:

              (1)①代表的是_________过程。为获得A基因表达载体,需用_________酶对A基因和载体进行切割。将A基因表达载体导入动物细胞常用的方法是______________。

              (2)利用PCR技术扩增A基因时,设计引物序列的主要依据是_______________________,加入引物的作用是___________________________________________。

              (3)与体内DNA复制相比较,PCR反应要在一定的缓冲溶液中才能进行,并且要严格控制_________等条件。

              (4)过程⑦采用的技术是________,获得的X叫细胞。

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