人血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值，只能从人血浆中制备。下图是以基因工程技术获取重组HSA(rHSA)的两条途径。

(1)为获取HSA基因，首先需采集人的血液，提取mRNA合成_________，然后以此为模板，采用___________________扩增HSA基因。

(2)启动子通常具有物种及组织特异性，构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA的载体，需要选择的启动子是______________________。

(3)利用农杆菌转化水稻受体细胞的过程中，需添加酚类物质，其目的是________________________________________________________________________。

(4)人体合成的初始HSA多肽，需要经过膜系统加工形成正确的空间结构才能有活性。与途径Ⅱ相比，选择途径Ⅰ获取rHSA的优势是___________________________________。

(5)为证明rHSA具有医用价值，须确认rHSA与________的生物学功能一致。

PCR技术是把某一DNA片段在酶的作用下，在体外合成许多相同片段的一种方法，利用它能快速而特异的扩增任何要求的目的基因或DNA分子片段；电泳技术则是在外电场作用下，利用分子携带的净电荷不同，把待测分子的混合物放在一定的介质(如琼脂糖凝胶)中进行分离和分析的实验技术，利用它可分离氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等物质作亲子鉴定。图中是电泳装置及相应电泳结果。

(1)PCR技术能把某一DNA片段进行扩增，依据的原理是______________________。PCR实验步骤主要包括_________________________。

(2)图3是把含21个氨基酸的多肽进行水解，得到的氨基酸混合物进行电泳的结果，据图可推知该多肽由______种氨基酸构成。

(3)图4通过提取某小孩和其母亲以及待测定的四位男性的DNA，分别由酶处理后，生成含有若干DNA片段，并进行扩增得到的混合物，然后进行电泳所得到的一组DNA指纹图谱。请分析：F₁～F₄中，谁是该小孩真正生物学上的父亲？______________为什么？_______________________________________________________________________。

(4)电泳过程中分子的迁移速率除了与本身所带的净电荷的多少有关外，你认为还与什么因素有关？(至少列出一种)________________________________________________________。

下图1为某种常用质粒的序列图，Lac Z基因编码的酶能使无色的X—gal变为蓝色，Amp为氨苄青霉素，抗性基因。图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列。请回答下列问题：

（1）若要筛选成功导入目的基因的重组质粒，培养基中应加入的物质有_________________和_________________，构建重组质粒时需要的工具酶有___________________________，对获取的目的基因可用_________________技术对其扩增。

（2）实验小组用BamH I和Blg II两种限制酶切割目的基因和质粒，构建重组质粒后导入大肠杆菌中，在筛选重组质粒的培养基上，若大肠杆菌菌落显蓝色，说明导入了______________________。没有导入任何外源DNA的大肠杆菌______________（填“能”或“不能”）在该培养基上生存。

（3）将若干个质粒和目的基因用BamH I和Blg II两种限制酶切割后，用DNA连接酶相连，然后再用BamH I和EcoR I切割成功连接后的产物，获得了长度为0.7kb、2.8kb、1kb和2.5kb四种长度的DNA片段，则目的基因的长度为____________kb（已知目的基因的长度大于1kb，1kb=1000个碱基对）。

编码蛋白甲的DNA序列(序列甲)由A、B、C、D、E五个片段组成，编码蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段组成，如图1所示。

回答下列问题：

(1)现要通过基因工程的方法获得蛋白乙，若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的DNA序列(TTCGCTTC—T……CAGGAAGGA)，则所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋向乙，原因是____________________________________________________。

(2)某同学在用PCR技术获取DNA片段B或D的过程中，在PCR反应体系中加入了DNA聚合酶、引物等，还加入了序列甲作为__________，加入了________作为合成DNA的原料。

(3)现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白，要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T淋巴细胞增殖的作用，某同学做了如下实验：将一定量的含T淋巴细胞的培养液平均分成四组，其中三组分别加人等量的蛋白甲、乙、丙，另一组作为对照，培养并定期检测T淋巴细胞浓度，结果如图2。

①如图2可知：当细胞浓度达到a时，添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，此时若要使T淋巴细胞继续增殖，可采用的方法是______。细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO₂浓度，CO₂的作用是______。

②仅根据图1、图2可知，上述甲、乙、丙三种蛋白中，若缺少________(填“A”“B”“C”“D”或“E”)片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果。

豆科植物细胞壁中含有大量不能被猪消化的甘露聚糖。研究人员通过基因工程等技术培育出转甘露聚糖酶基因（manA）猪，主要流程如下图，图中PSP为猪唾液腺分泌蛋白基因启动子，neo为新霉素抗性基因。请回答下列问题：

（1）该培养过程涉及多种现代生物工程技术，属于分子水平的是___________，其原理是______________________。

（2）PCR过程中，除了要加DNA模板以外，还需加________ 和________，以及所需的酶是_________。温度降低到55℃的目的是__________。

（3）PSP是______________识别和结合的部位，步骤②中选择将manA基因插入PSP后面的目的是___________________。

（4）若要获得大量的卵母细胞需要对成年母猪采用___________法以获得大量的卵细胞。

（5）进行早期胚胎培养时，通常将其置于通入混合气体的培养箱中培养，其中CO₂的主要作用是____________________；另外，需定期更换培养液，目的是___________________。

（6）步骤⑥中，通常选择发育到______________阶段的胚胎成功率较高。

（7）与饲养普通猪相比，饲养转基因猪的优势是____________________________。

某实验室做了下图所示的实验研究,请据图回答:

(1)与纤维母细胞相比,过程①形成的诱导干细胞的全能性较_____________。 

(2)过程②是诱导干细胞中基因_____________的结果。 

(3)过程③需要用_____________进行筛选,得到的Z细胞还需进行_____________培养和_____________,经多次筛选,就可以得到足够数量的能分泌所需抗体的细胞。 

(4)科学家找到一种“无限增殖调控基因”能激发细胞不断分裂,通过基因工程技术将该基因导入待定的_____________细胞(填细胞名称),来制备单克隆抗体,基因导入并成功表达后,该细胞将具有__________________________的特点,在上述操作中用到了PCR扩增仪,其作用是_____________。 

请利用所学知识回答基因工程方面的有关问题：

（1）基因工程所用的生物学原理为_________________，其操作的核心步骤为_________________，在操作的过程中没有涉及碱基互补配对的步骤为_________________，获取目的基因的来源有_________________和_________________。

PCR过程除需要适宜的温度、模板DNA、引物，还需要_____________、_____________等条件才能扩增出大量DNA片段。

（3）将目的基因导入植物细胞时，采用最多的方法是_________________。目的基因进入受体细胞后的表达过程中，RNA聚合酶需与_________________识别和结合，从而驱动转录过程。最终目的基因是否成功表达，常用_____________方法进行检测，若出现杂交带，表明目的基因已形成蛋白质产品。

（4）蛋白质工程是在基因工程的基础上发展起来的，其基本流程为_________________、________________、________________、找到对应的脱氧核苷酸序列。

下图1为某种常用质粒的序列图，Lac Z基因编码的酶能使无色的X—gal变为蓝色，Amp^r为氨苄青霉素抗性基因。图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列。请回答下列问题：

⑴若要筛选成功导入目的基因的重组质粒，培养基中应加入的物质有________和________。基因表达载体的组成除了目的基因外，还必须有_______、终止子和标记基因等。对获取的目的基因可用________技术对其扩增。

⑵实验小组用BamHⅠ和BlgⅡ两种限制酶切割目的基因和质粒，构建重组质粒后导入大肠杆菌中，在筛选重组质粒的培养基上，若大肠杆菌菌落显蓝色，说明导入了________；若大肠杆菌菌落显白色，说明导入了________。没有导入任何外源DNA的大肠杆菌________（填“能”或“不能”）在该培养基上生存。

⑶将若干个质粒和目的基因用BamHⅠ和BlgⅡ两种限制酶切割后，用DNA连接酶相连，若仅考虑质粒与目的基因相连接，会有   种连接方式。然后再用BamHⅠ和EcoRⅠ切割成功连接后的产物，获得了长度为0.8kb、3.8kb、1.1kb和3.5kb四种长度的DNA片段，则目的基因的长度为________kb（已知目的基因的长度大于2kb，1kb＝1000个碱基对）。

(1)该工程中不适宜用来切割质粒的限制酶是_________，原因是____________________________________。

(2)血清白蛋白基因可以从利用反转录法构建的______                     ___文库中获取。利用PCR技术扩增血清白蛋白基因时，设计引物序列的主要依据是________________________________，还需要在引物的一端加上__________________序列，以便于后续的剪切和连接。

(3)将目的基因和质粒进行连接后，需先用_________处理农杆菌以便将目的基因导入马铃薯细胞，筛选含有目的基因的细胞需在培养基中添加_________。

(4)从含有血清白蛋白基因的马铃薯细胞中提取血清白蛋白，需通过脱分化培养到愈伤组织，培养过程中需在培养基中添加的植物激素是_____________。

Ⅰ．利用大肠杆菌表达BglB酶

(1)PCR扩增bglB基因时，选用________基因组DNA作模板。

(2)上图为质粒限制酶酶切图谱。bglB基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB基因两端需分别引入________和________不同限制酶的识别序列。

(3)大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为_______________。

 Ⅱ．温度对BglB酶活性的影响

(4)据图1、2可知，80 ℃保温30分钟后，BglB酶会________；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在________(单选)。

A．50 ℃   B．60 ℃       C．70 ℃　     D．80 ℃

Ⅲ．利用分子育种技术提高BglB酶的热稳定性

在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高bglB基因的突变率。经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因。

(5)(多选)与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获得热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中________。

A．仅针对bglB基因进行诱变  B．bglB基因产生了定向突变

C．bglB基因可快速累积突变  D．bglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变