在玉米中,控制某种除草剂抗性(简称抗性,T)与除草剂敏感(简称非抗,t)、非糯性(G)与糯性(g)的基因分别位于两对同源染色体上。有人以纯合的非抗非糯性玉米(甲)为材料,经过EMS诱变处理获得抗性非糯性个体(乙);甲的花粉经EMS诱变处理并培养等,获得可育的非抗糯性个体(丙)。

请回答:

(1)获得丙的过程中,运用了         育种和　　 　　育种技术。

(2)若要培育抗性糯性的新品种,采用乙与丙杂交,F₁只出现抗性非糯性和非抗非糯性的个体;从F₁中选择表现型为　　　　的个体自交,F₂中有抗性糯性个体,其比例是　　　　　　。

(3)采用自交法鉴定F₂中抗性糯性个体是否为纯合子。若自交后代中没有表现型为　　 　　的个体,则被鉴定个体为纯合子；反之则为杂合子，且自交后代出现的性状及比例是             。

(4)拟采用转基因技术改良上述抗性糯性玉米的抗虫性。通常从其他物种获得　　　　　　,将其和农杆菌的　　　　　　用合适的限制性核酸内切酶分别切割,然后借助　　　　　　连接,形成重组DNA分子,再转移到该玉米的培养细胞中,经筛选和培养等获得转基因抗虫植株。

A．[生物技术实践]

淀粉分解菌是能分解淀粉的一类微生物，在自然条件下，淀粉分解菌和其他各种细菌混杂生活在土壤中。某实验小组利用培养基将土壤中的淀粉分解菌筛选出来，回答下列问题：

(1)将土壤中的淀粉分解菌筛选出来的培养基应添加________作为唯一的碳源，此外还需要添加的成分有___________________。

(2)稀释涂布平板法可用于微生物的接种和计数，该实验小组将样液分别稀释了10倍、10²倍、10³倍、10⁴倍，然后将10²倍、10³倍、10⁴倍的稀释液分别涂布在不同的平板上，涂布多个稀释倍数的稀释液的目的是____________________________________。若有三个平板均涂布了稀释倍数为10³倍的稀释液1mL，分别形成了68、70和72个菌落，则原样液体中每毫升含有淀粉分解菌________个，该方法测量值一般比实际值________。

(3)涂布一段时间后，待长出菌落后可向培养基中滴入________，挑取有明显淀粉分解圈的单菌落，一般来说，淀粉分解圈越大，则淀粉分解菌分解淀粉的能力越________。

B．[现代生物科技专题]

科学家从某细菌中提取抗冻基因，转入番茄并培育出抗冻番茄。下图是转抗冻基因番茄的培育过程，含抗冻基因的DNA片段和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。分析回答问题：

​

(1)若要获得抗冻基因，可以从细菌中提取；也可以通过分析抗冻蛋白________的序列推测基因的结构，进而人工合成抗冻基因。对获得的抗冻基因可用________技术进行扩增。

(2)上述两种途径获得的抗冻基因________(填“是”或“否”)一定相同，原因是_____________________________________________。

(3)用图中的质粒和抗冻基因构建重组质粒，不能使用SmaⅠ酶切割，原因是________。图中①②过程为防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，应选用________酶对外源DNA、质粒进行切割。

(4)图中过程⑤表示______________________________________。

Ⅰ．转基因克隆猪已在我国培育成功。研究组首先从猪胚胎皮肤细胞中分离出纤维细胞，进行体外培养。通过电穿孔的方法将构建好的基因表达载体转入纤维细胞，经筛选后将转基因纤维细胞进行体细胞克隆，再将重组胚胎移入代孕母猪子宫内，最终获得转基因克隆猪。请回答：

（1） 在对猪纤维细胞进行培养时，需要在细胞培养液中添加一定量的           ，以防止培养过程的污染。此外，应定期更换培养液，防止              对细胞自身造成危害。

（2） 筛选转基因细胞时，需要用到基因表达载体中的                。

（3） 在进行体细胞克隆前，先要从屠宰场收集猪卵巢，采集             ，并在体外培养成熟。然后将转基因纤维细胞核注入           中，再经过一系列过程获得含有目的基因的重组胚胎。

（4） 为了提高重组胚胎的利用率，可对处于           阶段的胚胎进行均等分割，再将重组胚胎移入代孕母猪子宫中继续发育成转基因克隆猪。一般地，代孕母猪需要用激素处理，促使其           以利于受孕。

Ⅱ．土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源。现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答：

（1） 分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，常用的灭菌方法有              （至少答2种）。

（2） 可用                法分离纯化得到能降解尿素的菌种。在接种活菌的过程中，要在          旁进行操作，接种后的培养皿            于37℃的            中培养。

（3） 用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌，若培养基中存在分解尿素的细菌，其菌落周围会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生的            使PH升高，使酚红指示剂产生颜色变化，从而证明这一菌株以尿素为氮源。变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力                 。

为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜叶片细胞并获得了转基因油菜品种。

（1）研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用             技术从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因，所含三种限制酶（ClaI、SacI、XbaI）的切点如图所示。则用      和        酶处理两个基因后，可得到     端与    端（填图中字母）相连的融合基因。

（2）将上述融合基因插入图所示Ti质粒的T-DNA中，构建     并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含     的固体平板上培养得到含融合基因的单菌落，再将其制备成用于转化的侵染液。

（3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞，进一步筛选后获得转基因油菜细胞，该细胞通过植物组织培养技术，可培育成转基因油菜植株。

（4）用     法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达