下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨芐青霉素抗性基因,BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答:

(1)获取目的基因的主要途径包括从自然界已有的物种中分离和                        。

(2)获取目的基因还可以使RNA 形成cDNA。获得目的基因可以通过            技术大量扩增。图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用 限制酶同时切割载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含                         的培养基上进行。 

(3)图中质粒除了所示结构以外，还必须含有 才能构成一个完整的基因表达载体。能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是图中的         。 

(4)过程①可采用的操作方法是 。 ②过程表示        。 

(5)为检测人乳铁蛋白是否成功表达,可采用               技术。 

[生物——选修3：现代生物科技专题]

（1）步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是                  。科研人员还在两种引物的一端分别加上了                                    和            序列，以便于后续的剪切和连接。

（2）过程②所构建的基因表达载体中未标注出的必需结构还有                ，过程③中需先用        处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。

（3）过程④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过               过程获得DNA，再进行PCR扩增，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是                                    。

（4）治疗中发现，用于口服的α-干扰素在胃中会受到一定程度的破坏影响其功效，需要利用                        技术加以改造，以达到满意效果。

[选修3——现代生物科技专题]

科学家从某细菌中提取抗冻基因，转入番茄并培育出抗冻番茄。下图是转抗冻基因番茄的培育过程，含抗冻基因的DNA片段和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。分析回答问题：

（1）若要获得抗冻基因，可以从细菌中提取，也可以通过分析抗冻蛋白________的序列推测基因的结构，进而人工合成抗冻基因。对获得的抗冻基因可用________技术进行扩增。

（2）上述两种途径获得的抗冻基因________（填“一定”或“不一定”）相同，原因是________。

（3）用图中的质粒和抗冻基因构建重组质粒，不能使用SmaⅠ酶切割，原因是________。图中①②过程为防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，应选用________酶对外源DNA、质粒进行切割。

（4）图中过程⑤表示________。

人参是一种名贵药材，具有良好的滋补作用。口服α-干扰素在慢性乙肝、丙肝及部分肿瘤的治疗中有一定疗效。下图为科研人员制备能合成干扰素的人参愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作，EcoRⅠ、BamHⅠ为限制酶，它们的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：

（1）步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是            。科研人员还在两种引物的一端分别加上了              和             序列，以便于后续的剪切和连接。

（2）过程②所构建的基因表达载体中未标注出的必需元件还有             ，过程③中需先               处理根瘤农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。

（3）过程④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过              过程获得DNA，再进行PCR扩增，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是                   。

（4）科研人员认为，将转干扰素基因的人参愈伤组织加工成的药物比单纯干扰素的疗效要好，其依据是                 。

凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶，研究人员利用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中并使之表达。下图表示EcoRI、BamHI、PstI三种限制酶在质粒和含凝乳酶基因的外源DNA片段上的切割位点。回答下列问题：

(1)根据图中EcoRI、BamHI、PstI三种限制酶的切割位点分析，该工程中最不适宜用来切割外源DNA获取目的基因的限制酶是      ，原因是      。将切割后的质粒和目的基因连接起来需要      酶。构建好的重组质粒在目的基因前要加上特殊的启动子，它是     识别和结合的部位。

(2)研究发现，如果将该凝乳酶第20位和第24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。科学家可以生产上述高效凝乳酶的现代生物工程技术是      。该生物工程技术对蛋白质结构的设计和改造，必须通过基因来完成，原因是              

[生物——选修1：生物技术实践]

已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题：

（1）显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用__________染色。微生物A产生的油脂不易挥发，可选用_________（填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”）从菌体中提取。

（2）为了从自然界中获得能产生脂肪酶分微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以___________为碳源的固体培养基进行培养。

（3）若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用__________直接计数；若要测定其活菌数量，可选用__________法进行计数。

（4）为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35℃、40℃、45℃温度下降解10g油脂所需酶量依次为4mg、1mg、6mg，则上述三个温度中，________℃条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕_________℃设计后续实验。

【生物——现代生物科技专题】

人的血清蛋白有广泛的药用价值，科学家通过培育乳腺生物反应器生产人血清白蛋白，流程如下：

(1)在基因工程中，①被称为__________________。若①因数量少而不能满足生产需要，常利用___________________技术进行扩增。

(2)②应该取自__________(雄性或雌性)荷斯坦奶牛，由②到③的过程中，需将②用_____________处理后进行培养。

(3)从③到④的过程中，用于核移植的供体细胞③一般都选用传代10代以内的细胞，原因是______________；作为受体细胞的卵母细胞需培养至____________期；形成④时常通过______________(物理方法)进行激活，使其完成分裂和发育进程。

(4)④培养至⑤后，可通过___________技术获得多个⑥，从而提高胚胎的利用率。胚胎移植的实质是___________________________________________________。

生物技术已经渗入到了我们生活的方方面面，比如：

（1）目前临床用的胰岛素生效较慢，科学家将胰岛素B链的第28和29个氨基酸调换顺序，成功获得了速效胰岛素。生产速效胰岛素，需要对______________（胰岛素/胰岛素mRNA/胰岛素基因）进行定向改造。将改造后的分子导入受体大肠杆菌，一般需要用________处理大肠杆菌细胞，使之成为____________细胞。

（2）科学家利用人绒毛膜促性腺激素的单克隆抗体，制作出了早早孕试纸。要获得人绒毛膜促性腺激素的单克隆抗体，需要先将____________________注射到小鼠体内，培养一段时间之后，将从小鼠的脾脏中提取出的____________和小鼠的骨髓瘤细胞融合，获得杂交细胞。

（3）许多不孕不育的夫妇受益于试管婴儿技术，在体外受精前，要对采集到的精子进行____________处理，才能与卵子受精。受精后形成的受精卵要移入_____________中继续培养一段时间再移植到母亲体内，早期胚胎发育到___________阶段的某一时刻，会冲破透明带，称为“孵化”。

（4）在进行林业工程建设时，一方面要号召农民种树，保护环境。另一方面要考虑贫困地区农民的生活问题，如粮食、烧柴以及收入等问题，其主要体现了生态工程的基本原理是__________________（填一个即可）。

（1）理论上，基因组文库含有生物的         基因；而cDNA文库中含有生物的            基因。

（2）若要从植物甲中获得耐旱基因，可首先建立该植物的基因组文库，再从中          出所需的耐旱基因，导入植物体细胞中，经过一系列的过程得到再生植株。要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的              ，如果检测结果呈阳性，再田间试验中检测植株的              是否得到提高。

（3）假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为3∶1时，则可推测该耐旱基因整合到了             （填“同源染色体的一条上”或“同源染色体的两条上”）。

（4）蛋白质工程的基本程序是：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的         序列→找到相对应的          序列

下图是利用现代生物工程技术治疗遗传性糖尿病的过程图解。请据图回答下列问题：

(1)图中②所示的生物技术的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，这是因为________；图中③所示的细胞名称是______________。

(2)重组细胞A培养过程所用的培养液与植物组织的培养基从成分上主要区别是前者必须含有___________。重组细胞A培养过程中所需要的基本条件包括充足的营养、_______、______、气体环境。

(3)④所示的生物技术名称是____________，若想得到大量健康的胰岛B细胞的胰岛素基因，可利用_______技术。

(4)图示方法与一般的异体移植相比最大的优点是_______。该种基因治疗所属类型为_________。

下图是科学家研究良种奶牛快速繁殖的过程示意图。

 请据图回答下列问题：

（1）克隆牛G的性别是              。

（2）从良种公牛A采集的精子，需经          处理，才能穿入到卵细胞内部。对良种母牛B进行           处理

（3）为了获得多个基因型相同的后代，可对早期胚胎进行                。

（4）胚胎移植中，需要对代孕D牛进行              处理，以保证胚胎能够在受体的子宫着床、继续生长发育。

（5）限制性核酸内切酶是能够识别和切割DNA分子内一小段特殊           的酶，该酶主要是从原核生物中分离的。若要构建重组DNA分子，通常用     的限制性核酸内切酶分别切割        和     从而形成相同的           ，然后用         将他们连接起来。该酶催化            键形成。

（6）下图为DNA分子的某一片段，其中①②③分别表示某种酶的作用部位，则相应的酶依次是                                   (　　)

A.DNA连接酶、限制性内切酶、解旋酶

B.限制性内切酶、解旋酶、DNA连接酶

C.解旋酶、限制性内切酶、DNA连接酶

D.限制性内切酶、DNA连接酶、解旋酶