科学家从链霉菌提取抗除草剂基因(bar基因)，用来培育抗除草剂作物。回答下列问题：

(2)将种子的胚划伤，简称划胚。请说出农杆菌将bar基因导入划胚细胞的过程：____________________________________________。

(3)某兴趣小组要探究各种划胚方式(包括横划、纵划和穿刺)对bar基因导入大豆种子胚细胞效率的影响。请将有关实验步骤补充完整。

步骤1：_______________________________________________中培养23天。

步骤2：用_____________________技术鉴定萌发植株的细胞是否导入bar基因。

(4)下表是不同植物对除草剂耐受性研究的实验结果。据表分析可知，玉米对除草剂耐受性最大，判断依据是_____________________________。

人的血清白蛋白(HSA)在临床上需求量很大，通常从人血中提取。但艾滋病病毒(HIV)等人类感染性病原体造成的威胁与日俱增，使人们对血液制品顾虑重重。如果应用基因工程和克隆技术，将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中，那么利用牛的乳腺细胞生产血清白蛋白就成为可能。其大致过程如下：

Ⅰ.采集良种供体奶牛的卵母细胞和精子，通过体外受精，形成受精卵；

Ⅱ.将人血清白蛋白基因导入奶牛受精卵，形成重组细胞；

Ⅲ.电脉冲刺激重组细胞，促使其形成早期胚胎；

Ⅳ.将胚胎移植到受体母牛的子宫中，最终发育成转基因小牛。

请回答下列问题：

(1)实验步骤Ⅰ中，在体外受精前，需要对奶牛的精子进行________处理。受精时，往往一个卵母细胞只能和一个精子结合，受精过程中防止多精入卵的生理反应包括________________________________________________________________________。

(2)实验步骤Ⅱ中，将人的血清白蛋白基因导入奶牛受精卵最为有效的方法是________。导入基因前，需要将血清白蛋白基因与奶牛乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，这一步骤的目的是__________________________________________________________________________________。

(3)实验步骤Ⅲ中,进行动物早期胚胎的体外培养时,培养液中除了含有各种无机盐和有机盐类、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外,还要添加_____和动物血清。

(4)实验步骤Ⅳ中，应选择性别为________的奶牛胚胎进行移植。

【选修3—现代生物科技专题】

   2016年日本动物学家培育出转基因“绿光猴”，其培育过程为：将能编码绿色荧光蛋白基因嵌入长尾猴的卵子中，使其受精，所生下的小猴受到紫外线照射时就成了全身发绿的“绿光猴”。

请据此回答下列问题：

（1）如果对已有的荧光蛋白基因进行大量扩增，需要用________方法，该方法的原理是DNA复制，这项技术需要用到________酶，该酶需从________的末端开始催化子链的延伸。

（2）绿色荧光蛋白基因需要构建成________之后，用________方法将其导入到长尾猕猴的卵子中。

（3）受精卵在体外培育成________后再利用________技术将其导入到受体猕猴的子宫中继续发育，检测所出生的猕猴是否为“绿光猴”通常用________方法。

【生物-选修3：现代生物科技专题】

pBV220质粒是被广泛应用的大肠杆菌载体，结构如下图所示。其中P_RP_L是启动子，rrB是基因转录终止信号，Ampr是氨苄青霉素抗性基因，ori是质粒复制起点，EcoRⅠ、HindⅢ、BamHⅠ、PstⅠ均为限制性内切酶。回答下列问题：

（1）从图中可看出，pBV220作为运载体具备的条件有               。

（2）将目的基因与此质粒构建基因表达载体时，通常用图中           两种限制酶切割此质粒，其优点是                     。用这两种酶可以切开

此质粒的    个磷酸二酯键，并且会          （填“消耗”或“产生”）同样数量的水分子。

（3）将构建好的基因表达载体导入大肠杆菌前，需用    处理大肠杆菌，使之成为       细胞，以提高转化效率。目的基因是否成功导入大肠杆菌，

可采用          进行检测。

【加试题】回答下列（一）（二）小题

（一）随着社会的发展，石油产品的使用越来越多，石油烃污染也越来越严重。为了筛选出分解石油烃能力强的微生物，人们不断地进行研究。下图为获取能分离出分解石油烃的微生物的土壤样品后的研究过程，请回答有关问题：

（1）获取土壤样品的取样地点最好选在  。为了能有效地分离出分解石油烃的微生物，过程①④所用的选择培养基只能以石油烃作为唯一碳源,其原因是  。

（2）根据⑤平板上生长的菌落，对④进行接种采用的方法是  ，若发现在⑤中无法区分菌落，可以将图中③取出的菌液    。

（3）纯化菌株时,通常使用的划线工具是  。采用  方法对其进行灭菌。划线的某个平板培养后,第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落,第二划线区域所划的第一条线上无菌落,其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误是  （写出一点即可）。

（二）毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIFⅡ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。

（2）在过程②中，用  酶处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术，叫细胞克隆。未经克隆化的细胞系具有  性。由于人们对动物细胞所需营养物质还没有完全搞清楚，因此在培养细胞时需在培养基中加入一定量的  ，在培养过程中应将培养瓶置于  培养。

（3）若要获得多只相同的转基因山羊，可对图中早期胚胎进行  后进行胚胎移植。

（4）下列有关转基因山羊培育过程的叙述，错误的是  。

A.图中重组细胞的细胞核来自导入目的基因的细胞

B.重组细胞最初分裂时开始进行DNA复制和基因的转录

C.将早期胚胎（如早期囊胚）植入到代孕母羊的输卵管或子宫角部位

D.如果KIFⅡ基因的序列是已知的，则可用化学方法合成或用聚合酶链式反应扩增该基因

[生物——选修3：现代生物科技专题]

研究发现，人体内的N基因是正常基因，无N基因的人会患严重肾病而早年夭折，科学家为治愈此病进行了相关探索。下图是对标记基因(绿色荧光蛋白基因，用GFP表示) 和N基因的酶切过程。请据图分析回答下列问题：

(1)切割基因时选用不同限制酶的目的是_______。切割完成后，需用DNA连接酶将两基因连接成GFP—N融合基因(以下称融合基因)，该融合基因的上游基因为______________。

(2)若用质粒做运载体，需用图中的______酶切割质粒。在构建的融合基因表达载体中，调控融合基因转录的结构为________。

(3)将融合基因表达载体包埋在由磷脂双分子层构成的脂质体内并转染ES细胞，融合基因表达载体进入ES细胞的方式为_______________。用激光激发ES细胞并用荧光显微镜观察，可确定细胞内有________现象的ES细胞转染了融合基因。

(4)ES细胞在功能上具有___________，当培养在________上时，细胞只分裂不分化。将整合了融合基因的ES细胞，在培养液中培养并加入相应的分化诱导因子后，ES细胞进行____________，最终形成正常的肾小球足突细胞，可用于该肾病的治疗。

菊天牛是菊花的主要害虫之一。科研人员将抗虫基因转入菊花，培育出抗虫菊花。图11是获得转基因菊花的技术流程，请据图回答：

（1）为了促进土壤农杆菌吸收重组质粒，可用______________处理土壤农杆菌，使其处于感受态。

（2）将重组质粒导入土壤农杆菌的目的是利用农杆菌能够_______________________的特点，使目的基因进入受体细胞中，并插入到菊花细胞的_______________上，最终形成转基因植株。

（3）将愈伤组织转移到添加一定浓度植物激素和_____________的培养基中，在适宜条件下进行培养，筛选转基因菊花。

（4）用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的基因时，需根据________________的核苷酸序列设计特异引物，以________________为模板进行第一轮扩增。

（5）将转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料以适当比例混合后饲喂菊天牛2龄幼虫，实验结果如下表所示。

①对照组应饲喂等量的_______________________________。

②据表分析，______________________________差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用。

①骨髓瘤细胞可以产生抗体，但不能无限增殖

②骨髓瘤细胞可以无限增殖，但不能产生抗体

③B淋巴细胞可以产生抗体，但不能无限增殖

④B淋巴细胞只有与骨髓瘤细胞融合才能产生抗体