人组织纤溶酶原激活物(htPA)是一种重要的药用蛋白,可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下:

(1)htPA基因与载体用 切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用      技术。 

(2)为获取更多的卵(母)细胞，要对供体母羊注射 ，使其     。采集的精子需要经过 才具备受精能力。 

(3)将重组表达载体导入受精卵常用的方法是     。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行 。在胚胎移植前，通过 技术可获得较多胚胎，这体现了早期胚胎细胞的 。 

(4)若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到 ，说明目的基因成功表达。 

假设A、b代表玉米的优良基因，这两种基因是自由组合的．现有AABB，aabb两个品种，为培育出优良品种AAbb，可采用的方法如图所示。

（1）由品种AABB、aabb经过         （填图中序号）的过程培育出新品种的育种方式称为杂交育种，应用此育种方式一般从     代才能开始选育AAbb个体，是因为从这代开始出现性状分离。

（2）若经过程②产生的子代总数为1616株，则其中基因型为Aabb理论上有   株．基因型为Aabb的植株经过过程③就可获得较纯的AAbb与aabb的数量比是        ．

（3）过程⑤常采用     技术可得到Ab个体幼苗，它属        体；再经秋水仙素处理，就可得到纯子AAbb，所以可以明显缩短了育种年限，它利用的原理是            。

（4）过程④是基因工程技术，它常用的运载体有       、噬菌体和动植物病毒；所用工具酶有限制酶和        ，过程⑦与④的育种方式比较，过程⑦的明显优势是    ．

  （1）在构建基因表达载体时，除了要在重组DNA中插入目的基因外，还需要有______________、_____________和_______________。

  （2）在番茄新品种的培育过程中，将目的基因导入受体细胞的方法叫做______________。

  （3）从图中可见，mRNA1和mRNA2的结合直接导致了____________________无法合成，最终使番茄获得了抗软化的性状。

  （4）普通番茄细胞导入目的基因后，先要接种到诱导培养基上培养，经___________过程后得到________________，然后再转接到分化培养基上，诱导出试管苗，然后进一步培养成正常植株。获得的转基因植物经有性生殖获得的后代，是否也具有转基因特性？___________。

  （5）利用基因工程进行育种，可以培育出具有新性状的植株，这种育种方式的优点是

①                            ；②                              。

假设A、b代表玉米的优良基因，这两种基因是自由组合的。现有AABB、aabb两个品种，为培育出优良品种AAbb，可采用的方法如下图所示：

（1）由品种AABB、aabb经过①、②、③过程培育出新品种的育种方式称为      。若经过②过程产生的子代总数为1552株，则其中基因型为AAbb理论上有     株。基因型为Aabb的类型经过过程③，子代中AAbb与aabb的数量比是     。

（2）过程⑤常采用       由AaBb得到Ab个体。与“过程①②③”的育种方法相比，过程⑤⑥的优势是       。

（3）过程④在完成目的基因与运载体的结合时，必须用到的工具酶是                  。

某家族有两种遗传病：β地中海贫血(“地贫”)是由于11号染色体上β－基因突变导致血红蛋白结构异常，基因型与表现型的关系如表1；蚕豆病是只在X染色体上G6PD酶基因显性突变(用D表示)导致该酶活性降低而引起的，但女性携带者表现正常，请回答：

表1

图1

(1)β－基因突变可产生β＋基因和β0基因，从生物多样性角度来看，这体现了________多样性。

(2)对家系部分成员的DNA用________酶来获取β基因片段。并对该基因片段进行PCR扩增后的产物电泳结果如图2所示，结合图1和表1，推断Ⅱ－8的基因型为________(两对基因)。

(3)Ⅲ－11个体的蚕豆病致病基因来自其亲本的________个体。

(4)若图中Ⅱ－9已怀孕则M个体出现蚕豆病的概率是________。

（1） 筛选微生物 L时，用            作为培养基中的唯一氮源，加入            凝固剂。接种时应采用           方法

（2） 下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是           灭菌

   A高压蒸汽     B 紫外灯照射      C 70%的酒精侵泡液      D过滤

（3）对微生物L进行扩大培养时宜采用            培养基，接种时采用           方法对接种环进行灭菌

（4）脲酶宜采用共价偶联法进行固定化，可通过检测固定化脲酶的           确定其应用价值。除此法外，酶的固定化方法还包括           及交联法等。

（二）下面是关于获得能产生人干扰素大肠杆菌的问题。请回答：

（5）用限制性核酸内切酶识别人干扰素基因和质粒中一段特定的          并切割，然后用           连接形成重组DNA。该质粒是一种含抗生素抗性基因的          核酸分子

 A.双链环状  B.单链环状  C.双链线状  D.单链线状

（6）将含有人干扰素基因的重组质粒导人到大肠杆菌，经含有           的培养基筛选等过程，最终获得能产生人干扰素的大肠杆菌。

如图是从酵母菌细胞内获取某植物需要的某种酶基因的流程，请回答下列问题：

​

(1)图中cDNA文库含有酵母菌的________基因，与基因组文库中的基因相比无________、_________。

(2)①过程提取的DNA需要用限制酶，该酶能够识别_____________________，并且使_____________________断开。

(3)为在短时间内大量获得目的基因，可用PCR方法扩增，该反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含 )、水、4种脱氧核苷酸、模板DNA、________和________。

(4)蛋白质工程也被称为第二代基因工程，其基本途径是从________出发，通过设计蛋白质结构和推测相应的氨基酸序列，进而确定相对应的________，据此获得基因，再经表达、纯化获得蛋白质。

（1） 由过程①获得的A为____________；过程①中需用到的酶有____________；过程①中，PCR扩增人凝血因子IX基因前需根据已知的一小段核苷酸序列合成出________。

（2） 利用A中的_________基因特性来筛选鉴定出含有人凝血因子IX基因的成纤维细胞。

（3） 进行胚胎移植时，代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生______________，这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。

（1）基因工程中，A→B利用____________技术，依据的原理是__________，其中①为__________过程。

（2）B→C为转基因绵羊的培育过程，其中③用到的生物技术主要有动物早期胚胎培养和____________。

（3）B→D为抗虫棉的培育过程，其中④过程常用的方法是____________，要确定目的基因(抗虫基因)导入受体细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在个体生物学水平上的鉴定过程：_____________________。

(1)在进行细胞培养时,要对取自转基因奶牛的组织细胞进行分散处理,形成单个细胞,这个过程中需要利用________酶处理。在培养过程中,将成纤维细胞置于5% CO₂的气体环境中,CO₂的作用是________。

(2)用于核移植的供体细胞,一般都选用传代10代以内的细胞,原因是________。

(3)在进行原代培养时,细胞增殖的方式是________,此外,细胞增殖还表现出________和接触抑制等特点。

(4)将进行培养的供体细胞的细胞核注入去核的卵母细胞中,去除卵母细胞细胞核的目的是________。

(5)在转基因奶牛的克隆过程中，下列哪项技术没有运用到 ________ 。     

A．细胞培养技术　　　　             B．细胞核移植

C．胚胎移植技术                    D．基因工程技术

(6) 转基因奶牛克隆的过程是否遵循孟德尔的遗传分离定律________。

(7)人生长激素基因能在奶牛细胞中表达，说明不同生物共用一套________。