科学家从某无限增殖细胞的细胞质中分离出无限增殖调控基因(prG)，该基因能激发细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更为广阔的前景。请回答：

(1)利用动物细胞融合技术制备单克隆抗体，常用聚乙二醇、________、电激等诱导因素诱导动物细胞融合。经选择性培养的杂交瘤细胞，还需进行________和________，经多次筛选以获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。

(2)有人提出用核移植技术构建重组细胞来生产单克隆抗体，请完成设计方案：

①取________细胞的细胞核，移植到去核的________细胞中，构成重组细胞。

②将重组细胞在________条件下做大规模培养或注射到小鼠________内增殖，以获得大量单克隆抗体。

(3)也有人提出，可以直接通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，其思路如图所示。

①酶A是指________，酶B是指__________________________。

②图中Ⅰ表示________，对Ⅱ进行检测与鉴定的目的是______________，Ⅲ所指的细胞具有的特点是_______________。

    (一)要获得遗传特性单一的大肠杆菌菌种，一般必须对原有的大肠杆菌菌种进行扩大培养、并利用纯化技术得到单菌落的菌种。请回答下列有关大肠杆菌的培养和分离实验的相关问题：

    (1)对买回来的大肠杆菌菌种进行扩大培养，一般用LB培养基，在培养基中为微生物提供碳源、氮源和能源的物质主要是__________，为调节渗透压，要加入一定量的___________。为进行大肠杆菌的分离，还要加入琼脂配制成固体培养基，并进行倒平板的操作。

    (2)获得纯净微生物培养物的关键是_____________________，为此，必须对培养器皿、接种用具和培养基进行严格灭菌。培养器皿和培养基一般采用_____________________法灭菌，接种环采用灼烧法灭菌。同时在接种或倒平板操作时，除了在超净台上进行操作并对实验者的衣着、手和实验空间进行严格清洁和消毒外，还必须_________________________，以防止空气中的杂菌污染。

    (3)大肠杆菌菌种的扩大培养一般采用液体培养基，接种后将培养基置于37℃摇床振荡条件下培养12小时。菌种的分离时一般在固体培养基上采用____________法，并将培养皿_______________状态。

    (二)科学家将蜘蛛的蛛丝基因导入山羊体内，创造出转基因山羊，使羊奶中含有一种独特的蛛丝蛋白。生产原理如下图。请回答：

    (1)将蛛丝蛋白基因和质粒通过甲过程形成的X物质为_____________。如果选取的受体细胞为体细胞，当在培养过程中出现接触抑制现象时，需要进行____________培养。要使重组细胞具有发育的全能性，乙过程需要的技术操作是____________。

    (2)下列关于丙过程的叙述，正确的是______。

    A．该过程为动物细胞培养，目的是获得更多的重组细胞

    B．该过程所用培养液的成分往往是相同的

    C．该过程在无菌条件下进行，需要提供CO₂来调节pH

    D．通过现代生物技术可以将重组细胞在体外培养成山羊个体

    (3)为了快速繁殖转基因山羊，还可在丁过程前对早期胚胎进行____________，经培养后再分别移植到____________________的代孕母羊的相应部位。

现代生物工程技术推动了医药学、免疫学和生态学的发展，如科学家将人的血清蛋白基因转入奶牛细胞中，利用牛的乳汁生产出人的血清蛋白等。

（1）从牛的组织获得单个细胞，通常需要用______________酶处理。

（2）将人血清蛋白基因导入牛的常用的方法是_______________。在导入之前，要用_____________酶构建基因表达载体，导入后再将受精卵送入母体的输卵管，受精卵即在输卵管内进行___________，开始发育。

（3）上述胚胎发育早期是在____________内进行的，这个时期称为卵裂期。在胚胎发育过程中，囊胚的___________将发育成转基因牛的各种组织。

（4）为了要泌乳，必须保证移植的胚胎为______性，一般的做法是取样_________做DNA分析性别鉴定。当转基因动物进入泌乳期时，可通过分泌的乳汁来生产人血清蛋白，因而称为_______________。

（5）单克隆抗体的制备中，将经抗原免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合，再用特定的___________培养基进行筛选，获得杂交瘤细胞后，还需进行___________培养和抗体检测，经过多次筛选，就能获得能分泌单一抗体的杂交瘤细胞。最后获得的杂交瘤细胞只能产生一种单一抗体的原因是___________。

（6）为建设美丽乡村，积极推进生态农业建设，依据生态工程___________的原理，合理设计食物链，使生态系统中的物质和能量得到分层次多级利用，使废弃物资源化，提高了能量的___________，减少了环境污染。

人的血清蛋白在临床上需求量很大，通常从血中提取。由于艾滋病等人类传染病造成的威胁与日俱增，使人们对血液制品心存疑虑。生物技术的发展与应用使利用动物生产人的血清蛋白成为可能，如图是上海某研究所培育生产出血清蛋白奶牛的流程。根据下图回答：

（1）雌性奶牛胚胎细胞是（   ）

A．雌性奶牛产生的卵细胞

B．雌性奶牛体内的受精卵

C．能发育成雌性奶牛的受精卵

D．从奶牛胚胎上取出的细胞，这个奶牛胚胎将发育成雌性奶牛

（2）将人的血清蛋白基因导入奶牛胚胎受体细胞时，常用方法是                ；

（3）小牛1、2、3的性别是              性，性状              。

（4）人体血清蛋白基因的表达要经历              和              两个过程，该基因能够在小牛体内表达产生人的血清蛋白，说明生物共用一套            

（5）此操作流程涉及的现代生物技术有动物细胞培养、              、              等。

已知二倍体番茄红果(A)对黄果(a)为显性,双子房(B)对多子房(b)为显性,高蔓(C)对矮蔓(c)为显性。现有三个纯系品种:Ⅰ(黄色、多子房、高蔓),Ⅱ(黄色、双子房、矮蔓),Ⅲ(红色、双子房、高蔓),为了快速获取红色、多子房、矮蔓纯系新品种。

(1)请完善以下实验步骤。

第一步:Ⅰ×Ⅱ→获得植株Ⅳ,让Ⅳ自交,从子代中选取黄色、多子房、矮蔓植株Ⅴ。

第二步:____________________________　。

第三步: 取植株Ⅵ的花药进行离体培养,获得单倍体幼苗,用秋水仙素处理,即可筛选获得红色、多子房、矮蔓纯系新品种。

(2)将上述植株V的离体细胞与植株Ⅲ的离体细胞融合,形成杂种细胞。

①促进融合时常采用的化学诱导剂是_____________。

②请画出该融合细胞中控制红色与黄色这对性状的染色体组成图,并标明相关基因。

(3)据报道,番茄红素具有一定的防癌效果。科学家将含有酵母S-腺苷基蛋氨酸脱羧酶基因(简称S基因)cDNA片段导入普通番茄植株,培育了番茄红素高的新品种。

①获得cDNA片段的方法是_________。

②假设S基因的一条链中A和T的总量为2 400个,占该片段总碱基的60%,用PCR扩增该基因,该基因复制n次共要dGTP______个。

③为确保S基因在番茄中表达,在构建基因表达载体时应插入特定的_________。

④将基因表达载体导入番茄的方法有农杆菌转化法和_________等。

如图是从酵母菌获取某植物需要的某种酶基因的流程，结合所学知识及相关信息回答下列问题：

（1）图中cDNA文库______基因组文库（填“大于”、“等于”或者“小于”）．

（2）（2）①过程提取的DNA需要__________的切割．

（3）（3）为在短时间内大量获得目的基因，可用________扩增的方法，其原理是___________．

（4）（4）目的基因获取之后，需要进行_________，其组成，必须有_________、________、_______以及标记基因等．此步骤是基因工程的核心．

I.我国科研人员克隆了100多个重要基因，取得了抗虫棉、抗虫玉米、耐除草剂大豆等一批重大转基因成果。请回答下列问题：

（1）抗虫棉中转入的Bt毒蛋白基因是从苏云金(芽孢)杆菌中分离出来的，该基因编码的Bt蛋白对哺乳动物        （填“有”或“无”）毒害作用。

（2）每一种Bt毒蛋白的杀虫范围有限，对现有的毒蛋白进行       ，使其具有更广杀虫范围，属于           （生物工程）的范围。

（3）随着转基因成果的不断涌现，人们对转基因生物的安全性的关注与日俱增，在食物安全、生物安全和           三个方面发生了激烈争论。

II.关注生态工程的建设。

（1）与传统的工程相比,生态工程是一类少消耗、          、可持续的工程体系。

（2）“无废弃物农业”是我国古代传统农业的辉煌成就之一,也是生态工程最早和最生动的一种模式，该模式主要遵循生态工程的              原理。我国西北一些地区年降雨量少，适宜种植灌木和草，却被硬性规定种植属于乔木的杨树，致使许多地方的杨树长成半死不活状，结果防护林成了残败的“灰色长城”。其失败的原因主要是违背了       原理。

（3）甘肃陇南地区的“九子登科”模式是哪种生态工程建设的实例？（ ）

A.草原生态恢复工程              B.城市环境工程

C.小流域综合治理生态工程    D.湿地生态恢复工程

(1)下列有关现代生物技术的叙述正确的是__________。

   A．基因工程与蛋白质工程都能制造出新的蛋白质
    B．动物细胞培养时通常需要添加血清
    C．动物的早期胚胎发育依次经过受精卵、卵裂、桑椹胚、孵化、囊胚、原肠胚等阶段
    D．DNA连接酶和DNA聚合酶都能使核苷酸之间形成磷酸二酯键，属于同一种酶
(2)基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤，其中的核心步骤是__________；
(3)植物组织培养的主要原理是植物细胞具有__________，具体过程是在__________和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞培养在人工配制的培养基上，给予适宜的条件，诱导其经过__________产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。
(4)克隆动物实际上是用__________方法得到的动物，也就是将一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的__________细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，最终发育为动物个体。
(5)生态工程是实现循环经济最重要的手段之一，请写出它遵循的基本原理（至少答两项）：________________________________________。

（1）如用大肠杆菌作为受体细胞，则该大肠杆菌中不应含有青霉素抗性基因，请阐述其原因？                                   。

（2）培养导入了重组质粒的大肠杆菌时，需配制培养基。该培养基除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入的物质有（    ）（多选）

A．细胞分裂素 B．琼脂 C．噬菌体 D．青霉素 

（3）培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是         ；一般对配制的培养液采用

         法灭菌。

（4）微生物接种培养时，可采用两种方法。下图为接种后微生物培养的效果图，那么，获得图A效果的接种方法是______________，获得图B效果的接种方法是_____________。

（5）与大肠杆菌相比，嗜热菌具有的特点是         。（多选）

质粒是基因工程中最常用的运载体，质粒上有标记基因，如图所示，通过标记基因可推知外源基因插入的位置，插入位置不同，细菌在培养基上的生长情况也不同。下图表示外源基因的插入位置（插入点有a、b、c）。

Ⅰ.（1）质粒的基本组成单位是___________，在基因工程中作为_________。

（2）将细菌放在含有四环素、氨苄青霉素中培养，属于基因工程操作中的_________步骤。

（3）在插入外源基因过程中用到的工具酶有__________。

Ⅱ.设计实验探究外源基因插入的位置。

（1）步骤：

①将导入外源基因的细菌进行培养产生大量细菌。

②分组：将细菌平均分成两组并标号为1，2。

③培养：将第1组细菌放入含氨苄青霉素的培养基上培养，________________________。

④观察并记录结果。

（2）预测实验结果及结论：

若__________________________，则外源基因插入点是a；

若__________________________，则外源基因插入点是c；

若__________________________，则外源基因插入点是b